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細(xì)胞復(fù)蘇和凍存講究“慢凍快溶”，復(fù)蘇時一定要將凍存在液氮或-80℃中凝固的細(xì)胞凍存液快速融化至37℃,，使胞外凍存時的冰晶迅速融化,，避免冰晶緩慢融化時進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,，對細(xì)胞造成損害,。
●打開水浴鍋加熱至37℃。
● 超凈臺上放好離心管（離心管規(guī)格選用15ml的）,，細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，移液管，紫外滅菌至少20至30分鐘,，吹風(fēng)5至10分鐘除去臭氧,。
● 37℃預(yù)熱好要復(fù)蘇細(xì)胞的培養(yǎng)液，也可以不用預(yù)熱培養(yǎng)液,，根據(jù)細(xì)胞情況選擇,。
●向離心管中加約5至10ml培養(yǎng)液，從液氮罐或-80℃中取出凍存細(xì)胞,，立即將凍存管放入37℃水浴中并輕輕搖動,，待融化后（約2min即可）立即將解凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含培養(yǎng)液的離心管中，800-1000rpm下離心5min,，棄上清,，加適量培養(yǎng)液輕輕吹打重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)移至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，輕晃使瓶底液體分散均勻,，標(biāo)好細(xì)胞名稱,、代數(shù)、復(fù)蘇日期,，顯微鏡下觀察后放入37℃,，5%CO2培養(yǎng)箱中。一般貼壁細(xì)胞過夜即可貼壁,，換液和傳代時間根據(jù)不同細(xì)胞生長情況而定,。
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