1. 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法操作（以 6 孔板為例）

稀釋核酸和脂質(zhì)體：分別取適量核酸和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑,，用 Opti - MEM 培養(yǎng)基稀釋,。一般而言，DNA 用量在 0.5 - 2μg,，脂質(zhì)體用量在 1 - 4μL,，具體比例依試劑說(shuō)明書(shū)和預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。例如,，某實(shí)驗(yàn)中,，將 4μg 質(zhì)粒用 200μl Opti - MEM 稀釋為 A 液，10μl lipo2000 用 200μl Opti - MEM 稀釋為 B 液,。

混合孵育：將稀釋后的核酸和脂質(zhì)體輕輕混合,，室溫孵育 15 - 20 分鐘，促使核酸和脂質(zhì)體形成復(fù)合物,。如上述例子,，將 B 液加入 A 液中，輕輕混勻,，室溫靜置 20 分鐘,。

更換培養(yǎng)基：吸除培養(yǎng)細(xì)胞的原培養(yǎng)基,，用無(wú)血清培養(yǎng)基或 Opti - MEM 培養(yǎng)基輕柔洗滌細(xì)胞 1 - 2 次，然后添加適量無(wú)血清培養(yǎng)基,。

加入轉(zhuǎn)染復(fù)合物：將孵育好的核酸 - 脂質(zhì)體復(fù)合物緩慢加入培養(yǎng)孔,，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板，使復(fù)合物均勻分布于細(xì)胞表面,。

培養(yǎng)：將細(xì)胞置于 37℃,、5% CO?培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)，4 - 6 小時(shí)后更換為（血清）細(xì)胞培養(yǎng)基,，維持細(xì)胞正常生長(zhǎng),。

2. 電穿孔轉(zhuǎn)染法操作

細(xì)胞準(zhǔn)備：收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，用 PBS 洗滌后,，使用電轉(zhuǎn)緩沖液重懸細(xì)胞,，調(diào)整細(xì)胞密度至合適范圍。

電轉(zhuǎn)參數(shù)設(shè)置：根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型和轉(zhuǎn)染核酸類(lèi)型,，設(shè)置適宜的電脈沖參數(shù),，如電場(chǎng)強(qiáng)度、脈沖時(shí)間,、脈沖次數(shù)等,。例如，某些細(xì)胞可能需要 1000V/cm 電場(chǎng)強(qiáng)度,，20ms 脈沖時(shí)間,，1 次脈沖。

轉(zhuǎn)染操作：將核酸與細(xì)胞懸液混合,，轉(zhuǎn)移至電轉(zhuǎn)杯中,，進(jìn)行電穿孔操作。電脈沖在細(xì)胞膜上形成電勢(shì)差,，誘導(dǎo)產(chǎn)生暫時(shí)的小孔,，使核酸進(jìn)入細(xì)胞。

細(xì)胞恢復(fù)：電轉(zhuǎn)后,，將細(xì)胞迅速轉(zhuǎn)移至含（血清）細(xì)胞培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿中，置于 37℃,、5% CO?培養(yǎng)箱培養(yǎng),，使細(xì)胞恢復(fù)生長(zhǎng)。

2. 檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率

報(bào)告基因檢測(cè)：若使用帶有報(bào)告基因（如綠色熒光蛋白 GFP）的質(zhì)粒進(jìn)行轉(zhuǎn)染,，可在轉(zhuǎn)染后 24 - 48 小時(shí),，通過(guò)熒光顯微鏡觀(guān)察報(bào)告基因表達(dá)情況，統(tǒng)計(jì)熒光陽(yáng)性細(xì)胞比例,，評(píng)估轉(zhuǎn)染效率,。

分子生物學(xué)檢測(cè)：采用 qPCR、Western blot 等技術(shù),，檢測(cè)目的基因 mRNA 或蛋白表達(dá)水平變化,，判斷轉(zhuǎn)染后基因的表達(dá)情況。例如,，通過(guò) qPCR 檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后目的基因 mRNA 表達(dá)量,，計(jì)算相對(duì)表達(dá)倍數(shù)。


ZETA LIFE 解決方案

ZETA LIFE 產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

Zeta Life 公司專(zhuān)注于細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品研發(fā)生產(chǎn),，其轉(zhuǎn)染試劑等產(chǎn)品具備顯著優(yōu)勢(shì),。產(chǎn)品在安全性上表現(xiàn)優(yōu)秀，生產(chǎn)過(guò)程遵循嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn),，最大限度降低對(duì)細(xì)胞的毒性,。生產(chǎn)流程自動(dòng)化且經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，符合 GMP 標(biāo)準(zhǔn),，保障了產(chǎn)品一致性,，不同批次間產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可靠。在性能方面,，針對(duì)多種難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系,，如 RAW264.7 細(xì)胞，能有效提高轉(zhuǎn)染效率,。

• RAW264.7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染方案

• 質(zhì)粒 DNA 準(zhǔn)備：確保質(zhì)粒 DNA 濃度為 700ng/ul,，溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水，且無(wú)內(nèi)毒素,?？墒褂?QIAGEN 試劑盒去除內(nèi)毒素。

• 細(xì)胞接種與轉(zhuǎn)染時(shí)機(jī)：先將細(xì)胞接種到細(xì)胞培養(yǎng)板,，待細(xì)胞匯合度達(dá) 70% 左右時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。

• 復(fù)合物制備：將質(zhì)粒 DNA 與 Zeta Life 公司 Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑（貨號(hào) AD600150）按照 1:1（如 12ug:12ul）比例直接混合，用移液器吹吸 10 - 15 次混勻,，室溫靜止 10 - 15 分鐘,。

• 轉(zhuǎn)染操作：將復(fù)合物加入含（血清）細(xì)胞培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)板，輕輕混勻,，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng),。不建議將復(fù)合物加入無(wú)血清培養(yǎng)基。

• 后續(xù)培養(yǎng)與檢測(cè)：轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后對(duì)細(xì)胞正常換液，質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48 小時(shí)后通過(guò)熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,。

• 其他細(xì)胞系轉(zhuǎn)染參考：對(duì)于不同細(xì)胞系,，Zeta Life 產(chǎn)品可依據(jù)細(xì)胞特性，在核酸與轉(zhuǎn)染試劑比例,、細(xì)胞接種密度,、轉(zhuǎn)染時(shí)間等方面進(jìn)行優(yōu)化調(diào)整。例如,，對(duì)于某些生長(zhǎng)緩慢的原代細(xì)胞,，可適當(dāng)降低細(xì)胞接種密度，延長(zhǎng)轉(zhuǎn)染時(shí)間,，同時(shí)調(diào)整核酸與轉(zhuǎn)染試劑比例,，以達(dá)到最佳轉(zhuǎn)染效果。在進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)前,，建議開(kāi)展預(yù)實(shí)驗(yàn),，摸索適合特定細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染條件。