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PUREfrex®1.0于2011年推出,，是基于PURE system開發(fā)的無細胞蛋白合成試劑盒，由轉(zhuǎn)錄,、翻譯,、能量再生所需的蛋白和核糖體組成,。
圖2.PUREfrex®使用流程
PUREfrex®1.0使用方法（僅供參考）：
以20ul反應體系為例,，如果需要擴大體積可以等比例增加對應試劑。
1. 在室溫或37℃下保溫1分鐘使溶液I完-全融解,，然后在冰上冷卻,。
2. 在冰上融化溶液II和溶液III。
3. 將溶液I,，溶液II和溶液III 渦旋后簡短離心收集管底內(nèi)容物,。
4. 根據(jù)下列表格配置反應液，每1kb加入模板DNA 1-3ng/ul,。
Water | 8-X μL |
Solution I | 10μL |
Solution II | 1μL |
Solution III | 1μL |
Template DNA | X μL |
總體積 | 20ul |
5. 在37°C的heat block或水浴中反應 2~4 h,，合成蛋白。
6. 分析合成蛋白,。通過SDS-PAGE驗證時,，請用水稀釋反應液后進行電泳。
試劑盒組分：
組分名稱 | 組分內(nèi)容 | 保存溫度 |
Solution I | Amino acids, NTPs, tRNAs and substrates for enzymes etc. | -20℃ |
Solution II | Proteins in 30 % glycerol buffer | -20℃/-80℃ |
Solution III | Ribosome (20 μM) | -80℃ |
DHFR DNA | PCR product containing a gene encoding dihydrofolate reductase (DHFR) from E.coli as a positive control. (20 ng/μL) | -20℃ |
請注意：1.在打開試劑盒之前請將試劑盒儲存在-80°C的溫度下,。2.溶液II和溶液III避免反復凍融,。
產(chǎn)品信息：
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
GFK-PF001-0.25-EX |
PUREfrex®1.0 | 1 x 250 µl |
GFK-PF001-2ML-EX | 2 ml | |
GFK-PF001-10ML-EX | 5 x 2 ml |
除了以上目錄產(chǎn)品外，Cosmo Bio也能根據(jù)客戶的需求提供定制的PUREfrex®1.0,。PUREfrex®1.0的成分信息是公開的,，您可以根據(jù)PUREfrex®1.0設計定制試劑盒。
PUREfrex®1.0組分
PUREfrex®1.0 Solution I (Buffer, Salts, Substrates)組分 |
Hepes-KOH pH 7.6 |
Potassium glutamate |
Magnesium acetate |
Spermidine |
Dithiothreitol |
10-Formyl-tetrahydrofolate |
4 NTPs |
20 Amino acids |
Creatine phoshate |
tRNA mixture |
PUREfrex®1.0 Solution II (Proteins)組分 |
20 Aminoacyl-tRNA synthetases (ARS) |
Methionyl-tRNA transformylase (MTF) |
3 Initiation factors (IF1, IF2, IF3) |
3 Elongation factors (EF-Tu, EF-Ts, EF-G) |
3 Release factors (RF1, RF2, RF3) |
Ribosome recycling factor (RRF) |
T7 RNA polymerase |
Nucleoside diphosphate kinase (NDK) |
Adenylate kinase (ADK, myokinase) |
Ceatine kinase (CK) |
Pyrophosphatase (PPiase) |
PUREfrex®1.0 Solution III組分 |
Ribosome |
定制應用舉例
（-）RF1 | 用于通過如下圖所示的琥珀抑制合成含有非天然氨基酸的蛋白質(zhì),。 |
（-）T7 RNA polymerase | 可用于檢測其他RNA聚合酶性能,，如大腸桿菌RNA聚合酶。 |
（-）特異性氨基酸和（或）20種氨酰tRNA合成酶 | 用于合成含非天然氨基酸或少于20個氨基酸的蛋白質(zhì),。 |
圖3.琥珀抑制途徑合成含有非天然氨基酸的蛋白質(zhì)示意圖
當您的蛋白質(zhì)需要分子伴侶的幫助或形成二硫鍵以形成正確的構象時,，只需向PUREfrex®1.0中添加補充試劑即可。
分子伴侶-幫助蛋白正確折疊,，合成可溶形式蛋白質(zhì)
產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
GFK-PF003-0.5-EX | DnaK Mix | 500 µl Equivalents |
GFK-PF003-10ML-EX | DnaK Mix | 5 x 2 ml Equivalents |
GFK-PF004-0.5-EX | GroE Mix | 500 µl Equivalents |
GFK-PF004-10ML-EX | GroE Mix | 5 x 2 ml Equivalents |
幫助形成二硫鍵的添加物
產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
GFK-PF005-0.5-EX | DsbC Set | 500 µl Equivalents |
GFK-PF005-10ML-EX | DsbC Set | 5 x 2 ml Equivalents |
GFK-PF006-0.5-EX | PDI Set | 500 µl Equivalents |
GFK-PF006-10ML-EX | PDI Set | 5 x 2 ml Equivalents |
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