UFC5010BK Merck Millipore 超濾管 0.5ml 10KD 用戶指南

——高效生物分子濃縮與純化的實(shí)驗(yàn)室利器

一、產(chǎn)品概述

UFC5010BK 是默克密理博（Merck Millipore）旗下 Amicon® Ultra 系列超濾離心管,，專為生物分子（如蛋白質(zhì),、核酸、抗體等）的濃縮,、脫鹽及緩沖液置換設(shè)計(jì),。該產(chǎn)品采用 10,000 Dalton 分子量截留（MWCO） 的再生纖維素膜（Ultracel®-10），結(jié)合垂直濾膜與反向旋轉(zhuǎn)回收技術(shù),，可實(shí)現(xiàn) 90%以上樣品回收率 和 25–30倍濃縮系數(shù),，適用于 HPLC 前處理、蛋白純化及臨床樣本分析等場(chǎng)景,。

二,、技術(shù)規(guī)格

• 膜材質(zhì)：Ultracel®再生纖維素

• 截留分子量（MWCO）：10,000 Dalton

• 樣品容量：0.5 mL（最大起始體積）

• 濃縮后體積：15–20 μL（典型值）

• 離心條件：

• 濃縮：14,000 × g（最大），推薦 7,500–10,000 × g

• 回收：1,000 × g（反向旋轉(zhuǎn)）

• 化學(xué)兼容性：pH 1–9,，兼容 SDS,、Tris-HCl、尿素等緩沖體系

• 無菌性：非無菌,，一次性使用

• 存儲(chǔ)條件：15–30°C,，保質(zhì)期 3 年

三,、核心優(yōu)勢(shì)

1. 高效濃縮

• 垂直濾膜設(shè)計(jì)減少濃差極化，避免濾膜堵塞,，處理時(shí)間僅需 10–30分鐘,。

• 示例：0.25 mg/mL 細(xì)胞色素 c（12.4 kDa）濃縮后回收率 >95%。

2. 高回收率

• 低吸附濾膜與聚丙烯外殼結(jié)合,，實(shí)現(xiàn) >90% 樣品回收率（稀釋起始溶液）,。

• 反向旋轉(zhuǎn)功能確保濃縮物回收，避免吸量誤差,。

3. 靈活應(yīng)用

• 支持蛋白,、核酸、抗體等生物分子的濃縮與純化,。

• 可用于去除引物,、連接子或標(biāo)記反應(yīng)中的高分子雜質(zhì)。

四,、操作流程

（一）預(yù)處理

1. 潤(rùn)洗：

• 新管使用前,，加入超純水至膜上方，冰浴或 4°C 預(yù)冷 5 分鐘,，倒出液體,。

• 重復(fù) 1 次，確保膜潤(rùn)濕,。

2. 平衡：

• 將超濾管插入 1.5 mL 離心管中,，使用相同型號(hào)空管進(jìn)行離心平衡。

（二）加樣

1. 樣品量：

• 加入體積不超過管頂白線（通常 ≤500 μL）,。

• 示例：0.5 mL 1 mg/mL BSA 溶液,。

2. 離心：

• 4°C 預(yù)冷離心機(jī)，設(shè)置轉(zhuǎn)速 ≤10,000 × g,，離心 15–30 分鐘,。

• 示例參數(shù)：7,500 × g、25 分鐘（10,000 MWCO 膜濃縮 0.25 mg/mL 細(xì)胞色素 c）,。

（三）濃縮與回收

1. 濃縮判斷：

• 當(dāng)濾液體積接近 1 mL 時(shí),，取 50 μL 緩沖液 +10 μL 濾液，通過 Bradford 法或電泳檢測(cè)蛋白泄漏,。

2. 緩沖液置換：

• 濃縮至 1 mL 后,，加入等體積新緩沖液（經(jīng) 0.22 μm 過濾），重復(fù)離心 3 次,。

3. 終體積調(diào)整：

• 根據(jù)需求,，將樣品濃縮至 ≤50 μL（如需更高濃度，可降低轉(zhuǎn)速至說明書推薦值以下）,。

4. 反向旋轉(zhuǎn)回收：

• 離心結(jié)束后,，將超濾管倒置,，1,000 × g 離心 1–2 分鐘，回收濃縮液,。

（四）清洗與保存

1. 清洗：

• 使用后,，用超純水沖洗 3 次，再用 75% 乙醇沖洗 1 次,。

• 殘留水可通過 1,000 × g 離心 1 分鐘去除,。

2. 保存：

• 干燥后置于 4°C 或 -20°C 保存，避免膜干燥開裂,。

五,、應(yīng)用案例

1. 蛋白質(zhì)濃縮

• 使用 UFC5010BK 將 1 mL 0.5 mg/mL BSA 濃縮至 100 μL，回收率 92%（7,500 × g,、10 分鐘）,。

2. 核酸脫鹽

• 0.5 mL 50 ng/μL DNA 溶液經(jīng) 3 次緩沖液置換，鹽濃度從 150 mM 降至 10 mM 以下,。

3. 抗體純化

• 從組織培養(yǎng)基中濃縮抗體,，結(jié)合 UFC5010BK 與蛋白 A 親和柱，實(shí)現(xiàn)抗體純化與脫鹽同步進(jìn)行,。

六,、質(zhì)量控制與驗(yàn)證

1. 批次一致性：

• MWCO 驗(yàn)證（電泳法）

• 回收率測(cè)試（BSA/DNA 標(biāo)準(zhǔn)品）

• 膜完整性檢測(cè)（氣泡壓力法）

• 每批次提供 CoA（Certificate of Analysis），包含：

2. 性能驗(yàn)證：

• 重復(fù)性測(cè)試（n=10）：BSA 回收率 CV ≤3%,，DNA 濃縮時(shí)間 CV ≤5%,。

七,、注意事項(xiàng)

1. 操作安全：

• 避免膜干燥,，潤(rùn)濕后保持濕潤(rùn)狀態(tài)直至使用結(jié)束。

• 離心時(shí)確保轉(zhuǎn)子平衡,，防止離心機(jī)損壞,。

2. 樣品兼容性：

• 高粘度樣品（如甘油）需稀釋后使用。

• 強(qiáng)酸/強(qiáng)堿溶液可能腐蝕再生纖維素膜,，需預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,。

3. 離心條件：

• 離心時(shí)間過長(zhǎng)可能導(dǎo)致蛋白沉淀，建議分步離心并監(jiān)測(cè)濾液狀態(tài),。