Eaivelly 人細胞凋亡抑制因子 ELISA Kit 用戶指南

——精準定量細胞凋亡抑制因子的科研利器

一,、產(chǎn)品概述

Eaivelly 人細胞凋亡抑制因子 ELISA Kit 是基于雙抗體夾心法（Sandwich ELISA）的定量檢測試劑盒，專為科研單位設計,，用于 人血清、血漿,、組織勻漿液,、細胞培養(yǎng)上清液及尿液 中細胞凋亡抑制因子（IAP）的精準定量分析。該試劑盒通過 高效,、靈敏,、特異的抗體 結(jié)合酶聯(lián)反應，生成與目標蛋白濃度成正比的顏色信號,，支持 0.2 IU/L 至 6 IU/L 的檢測范圍,，靈敏度達 3 pg/mL（具體批次可能略有差異）。

二,、核心組件與參數(shù)

三、技術(shù)優(yōu)勢

1. 高效靈敏

• 采用 高效價,、高特異性抗體,，檢測限低至 3 pg/mL，確保低豐度蛋白的精準捕獲,。

• 重復性 CV% < 9%（批內(nèi)） 和 < 11%（批間）,，保證實驗結(jié)果穩(wěn)定性。

2. 廣泛適用性

• 支持多種樣本類型,，包括 血清,、血漿、組織勻漿液,、細胞培養(yǎng)上清液及尿液,，滿足不同研究需求。

• 吸附性能優(yōu)異,，固相載體空白值低,，孔底透明度高，確保顯色均勻,。

3. 節(jié)省成本

• 預包被板設計減少人工包被步驟,，降低操作難度與試劑消耗。

• 試劑盒提供 48 孔或 96 孔 兩種規(guī)格,，適配不同實驗規(guī)模,。

四、操作流程

（一）樣本準備

1. 血清/血漿

• 室溫靜置 10-20 分鐘使血液自然凝固，2000-3000 rpm 離心 20 分鐘,，取上清,。

• 如需長期保存，分裝后置于 -20℃ 或 -70℃,，避免反復凍融,。

2. 組織勻漿液

• 切割組織后，按 1:10（w/v） 加入 PBS（pH 7.4）,，勻漿后 2000-3000 rpm 離心 20 分鐘，取上清,。

3. 細胞培養(yǎng)上清液

• 直接收集上清,，2000-3000 rpm 離心 20 分鐘，去除細胞碎片,。

（二）標準曲線構(gòu)建

1. 將標準品復溶后,，用標準品稀釋液進行 2 倍梯度稀釋，得到 1800,、1200,、600、300,、150 ng/L 的濃度梯度,。

2. 在酶標包被板上設置 10 個標準孔，每孔加入 50 μL 稀釋后的標準品,。

（三）加樣與孵育

1. 在待測樣品孔中加入 40 μL 樣品稀釋液 和 10 μL 樣本（稀釋 5 倍）,。

2. 每孔加入 50 μL 酶標試劑，空白孔僅加稀釋液與酶標試劑,。

3. 用封板膜密封后,，37℃ 孵育 30 分鐘。

（四）洗滌與顯色

1. 棄去液體,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去，重復 5 次,。

2. 每孔加入 50 μL 顯色劑 A 和 B,，輕輕震蕩混勻，37℃ 避光顯色 15 分鐘,。

3. 每孔加入 50 μL 終止液,，立即在 450 nm 波長 下測定 OD 值。

（五）結(jié)果計算

1. 以標準品濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標,，繪制標準曲線。

2. 根據(jù)樣品 OD 值，通過標準曲線計算實際濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)（5 倍）,。

五、應用場景

1. 細胞凋亡機制研究

• 定量分析不同處理條件下 IAP 表達變化,，揭示凋亡調(diào)控網(wǎng)絡,。

2. 腫瘤生物學研究

• 評估 IAP 在腫瘤細胞中的表達水平，探索其作為治療靶點的潛力,。

3. 藥物研發(fā)

• 檢測藥物對 IAP 表達的調(diào)控作用,，輔助抗凋亡藥物的篩選與優(yōu)化。

4. 疾病診斷

• 分析 IAP 在血清或組織中的異常表達,，輔助相關疾病的早期診斷,。

六、注意事項

1. 樣本質(zhì)量

• 避免使用溶血,、脂血或高濃度 NaN? 的樣本,，以免干擾檢測結(jié)果。

2. 操作規(guī)范

• 加樣時間控制在 5 分鐘內(nèi),，避免因孵育時間差異導致誤差,。

• 顯色反應需在 加終止液后 15 分鐘內(nèi) 完成測定。

3. 試劑保存

• 未開封試劑盒需置于 2-8℃ 保存,，開封后未用完的板條需密封保存,。

• 濃縮洗滌液在低溫下可能結(jié)晶，使用前需 水浴加溫助溶,。