氨基酸( AA)含量檢測(cè)試劑盒（微量法）

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1044

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體100mL×1瓶,，4℃保存,。

試劑二：液體20mL×1瓶,，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶,，4℃避光保存,。臨用前加入1.33mL無水乙醇，蓋緊后充分混勻,，再加入18.67 mL蒸餾水混勻，避光保存,。

試劑四：粉劑×1支，4℃避光保存,。臨用前加2mL蒸餾水,，充分溶解。

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1支,，10mg半胱氨酸,，4℃保存。臨用前加入8.26mL蒸餾水,，得到10μmol/mL的半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液備用,。

產(chǎn)品說明：

動(dòng)物肝臟,、腎臟是氨基酸代謝的主要器官，故尿中氨基酸的變化最能反應(yīng)肝,、腎的生理狀態(tài),。另外，氨基酸還能反應(yīng)灼傷,、傷寒等方面情況。植物體內(nèi)氨基酸含量對(duì)研究植物在不同條件下及不同生長發(fā)育時(shí)期氮代謝變化,、植物對(duì)氮素的吸收,、運(yùn)輸,、同化及營養(yǎng)狀況等有重要意義。

氨基酸的α-氨基可與水合茚三酮反應(yīng),，產(chǎn)生藍(lán)紫色化合物，在570 nm有特征吸收峰,；通過測(cè)定570nm吸光度，來計(jì)算氨基酸含量,。 

需自備的儀器和用品：

臺(tái)式離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、水浴鍋,、微量玻璃比色皿/96孔板,、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器,、無水乙醇、冰和蒸餾水,。

操作步驟：

一,、樣品的提?。?/span> 

(1) 組織樣本：稱取約0.1g組織,，加試劑一1mL，室溫下充分研磨,，轉(zhuǎn)移到1.5mLEP管中，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取15min,；自來水冷卻后，10000rpm,，4℃離心10min，取上清液,，待測(cè)。

(2) 細(xì)菌或細(xì)胞樣本：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清；按照每500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一,，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％,，超聲3s,，間隔10s,，重復(fù)30次）,；10000rpm,，4℃離心10min,，取上清液，待測(cè),。

二、測(cè)定步驟：

1,、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至570nm,，蒸餾水調(diào)零。

2,、 操作表：（在EP管中進(jìn)行）

三：氨基酸含量計(jì)算：

（1）按樣本質(zhì)量計(jì)算

氨基酸含量（μmol /g 鮮重）=（C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管）÷（W÷V樣總×V樣）

=10×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管÷W

（2）按蛋白濃度計(jì)算

氨基酸含量（μmol /mg prot）=（C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管）÷（Cpr×V樣）

=10×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管÷Cpr

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

氨基酸含量 (μmol/10⁴ cell) =(C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管)÷（500×V樣÷V樣總）

=0.02×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管

（4）按液體體積計(jì)算

氨基酸含量（μmol/mL）=（C標(biāo)準(zhǔn)品×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管）×2=20×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管

C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度,，10μmol/mL,；V標(biāo)準(zhǔn)品：反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積,，0.01mL,；W：樣品鮮重,，g；V樣：反應(yīng)體系中加入樣品體積,，0.01mL；V樣總：樣品提取液總體積,，1mL；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),，500萬個(gè)；2：提取液體時(shí)的稀釋倍數(shù),，（V液體+V試劑一）/V液體=2,。

注意事項(xiàng)：

1,、試劑盒中試劑三和試劑四均需臨用前配制，且避光保存,。

2、為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,，需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),。

3、脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)在570nm處無吸收峰,，因此，570nm處測(cè)定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量,。

4、如果樣本吸光值大于0.78,，建議將樣本用試劑一稀釋后進(jìn)行測(cè)定。

5,、因提取過程中會(huì)使蛋白變性，若使用蛋白濃度計(jì)算時(shí)需用PBS單獨(dú)提取后再測(cè)定,。

氨基酸( AA)含量檢測(cè)試劑盒（微量法）

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1044

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存,。

試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存,。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存,。臨用前加入1.33mL無水乙醇，蓋緊后充分混勻,，再加入18.67 mL蒸餾水混勻,，避光保存。

試劑四：粉劑×1支,，4℃避光保存,。臨用前加2mL蒸餾水,，充分溶解。

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1支,，10mg半胱氨酸，4℃保存,。臨用前加入8.26mL蒸餾水，得到10μmol/mL的半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液備用,。

產(chǎn)品說明：

動(dòng)物肝臟、腎臟是氨基酸代謝的主要器官,，故尿中氨基酸的變化最能反應(yīng)肝、腎的生理狀態(tài),。另外，氨基酸還能反應(yīng)灼傷,、傷寒等方面情況,。植物體內(nèi)氨基酸含量對(duì)研究植物在不同條件下及不同生長發(fā)育時(shí)期氮代謝變化,、植物對(duì)氮素的吸收、運(yùn)輸,、同化及營養(yǎng)狀況等有重要意義。

氨基酸的α-氨基可與水合茚三酮反應(yīng),，產(chǎn)生藍(lán)紫色化合物，在570 nm有特征吸收峰,；通過測(cè)定570nm吸光度，來計(jì)算氨基酸含量,。 

需自備的儀器和用品：

臺(tái)式離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板,、可調(diào)式移液槍,、研缽/勻漿器、無水乙醇,、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一,、樣品的提取： 

(1) 組織樣本：稱取約0.1g組織,，加試劑一1mL，室溫下充分研磨,，轉(zhuǎn)移到1.5mLEP管中,，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取15min,；自來水冷卻后，10000rpm,，4℃離心10min，取上清液,，待測(cè),。

(2) 細(xì)菌或細(xì)胞樣本：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清,；按照每500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％,，超聲3s，間隔10s,，重復(fù)30次）；10000rpm,，4℃離心10min,，取上清液,，待測(cè),。

二,、測(cè)定步驟：

1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至570nm，蒸餾水調(diào)零,。

2,、 操作表：（在EP管中進(jìn)行）

三：氨基酸含量計(jì)算：

（1）按樣本質(zhì)量計(jì)算

氨基酸含量（μmol /g 鮮重）=（C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管）÷（W÷V樣總×V樣）

=10×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管÷W

（2）按蛋白濃度計(jì)算

氨基酸含量（μmol /mg prot）=（C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管）÷（Cpr×V樣）

=10×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管÷Cpr

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

氨基酸含量 (μmol/10⁴ cell) =(C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管)÷（500×V樣÷V樣總）

=0.02×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管

（4）按液體體積計(jì)算

氨基酸含量（μmol/mL）=（C標(biāo)準(zhǔn)品×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管）×2=20×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管

C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度,，10μmol/mL,；V標(biāo)準(zhǔn)品：反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.01mL,；W：樣品鮮重，g,；V樣：反應(yīng)體系中加入樣品體積,，0.01mL；V樣總：樣品提取液總體積,，1mL；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),，500萬個(gè)；2：提取液體時(shí)的稀釋倍數(shù),，（V液體+V試劑一）/V液體=2,。

注意事項(xiàng)：

1、試劑盒中試劑三和試劑四均需臨用前配制,，且避光保存,。

2、為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,，需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)。

3,、脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)在570nm處無吸收峰,，因此，570nm處測(cè)定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量,。

4,、如果樣本吸光值大于0.78，建議將樣本用試劑一稀釋后進(jìn)行測(cè)定,。

5,、因提取過程中會(huì)使蛋白變性，若使用蛋白濃度計(jì)算時(shí)需用PBS單獨(dú)提取后再測(cè)定,。