熒光顯微鏡是一種利用熒光現(xiàn)象進行觀察的特殊光學(xué)顯微鏡,,在生命科學(xué),、醫(yī)學(xué),、材料科學(xué)等領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。
熒光顯微鏡利用被稱為熒光的自然現(xiàn)象,。在熒光顯微鏡下,,通過激發(fā)樣品內(nèi)部的某些細胞結(jié)構(gòu)或者分子等,使他們進入到激發(fā)態(tài),,當它們回到基態(tài)時,會釋放出可見光區(qū)的光,,通過放大并檢測此熒光來生成圖像,。因為熒光只從被激發(fā)的分子發(fā)射出來,所以它可以提供高度選擇性的成像能力,。
工作原理:
1,、激發(fā)熒光:使用特定波長的光照射樣本,樣本中的熒光物質(zhì)吸收激發(fā)光能量后躍遷至高能級狀態(tài),。
2,、發(fā)射熒光:處于激發(fā)態(tài)的熒光物質(zhì)不穩(wěn)定,返回基態(tài)時發(fā)射出波長更長的熒光,。
3,、濾光成像:通過激發(fā)濾光片確保特定波長激發(fā)光照射樣本,阻擋濾光片僅允許熒光信號到達觀察者,,配合暗視野背景形成高對比度圖像,。
熒光顯微鏡是免疫熒光細胞化學(xué)的基本工具。它是由光源,、濾板系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成,。是利用一定波長的光激發(fā)標本發(fā)射熒光,通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大以觀察標本的熒光圖像,。
功能:
1,、熒光標記觀察:對細胞內(nèi)特定分子進行熒光標記,實時監(jiān)測其動態(tài)變化,。
2,、高對比度成像:暗視野背景與熒光信號形成強反差,可分辨微弱熒光信號。
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