ECL化學(xué)化學(xué)發(fā)光底物(超敏)可為使用辣根過氧化物酶(HRP)偶聯(lián)物的免疫印跡實驗提供明亮的信號和低皮克級檢測靈敏度。 該ECL底物能夠兼容各種膜,、封閉液和寬范圍抗體稀釋液,,以出色性能,、通用性和高性價比,滿足用戶的免疫印跡應(yīng)用需求,。
操作步驟:
1,、執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉(zhuǎn)模和Western Blot步驟,。 注意用HRP標(biāo)記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法,。
2、Western Blot最后一次洗模的同時配置發(fā)光工作液:分別取等體積的A液和B液,,放入干凈容器中混合(注意吸取A液和B液的吸頭一定要分開,,避免試劑污染)。 建議立即使用工作液,室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度有所降低,。
3,、Western Blot最后一次洗膜后,用鑷子將膜取出,,用濾紙吸去多余的洗滌液(切勿接觸膜的蛋白面),,然后置于一潔凈保鮮膜上或塑料容器內(nèi)。
4,、根據(jù)膜的大小按比例滴加配置好的ECL工作液到膜上,,確保工作液均勻覆蓋在膜上,放置1-3分鐘,。
5,、取膜,用濾紙吸去多余的液體,,將膜放在兩篇保鮮膜中間,,隨后進(jìn)行壓片檢測或化學(xué)發(fā)光成像儀檢測。
6,、壓片檢測:將膜固定于X光膠片暗盒內(nèi)(注意蛋白面向上),。 暗房內(nèi)壓X光膠片,分別曝光不同的時間,,如數(shù)秒到數(shù)分鐘,,顯影沖洗。
7,、化學(xué)發(fā)光成像儀檢測:將膜放置到化學(xué)發(fā)光成像儀內(nèi),,參考儀器說明書進(jìn)行檢測。
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