無(wú)外泌體胎牛血清|千舍現(xiàn)貨

名稱(chēng)：無(wú)外泌體胎牛血清

貨號(hào)： FBS050-EXO

規(guī)格：50ML

品牌：WINSERA

在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,，胎牛血清（FBS）一直是不能缺少的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑,。然而,，傳統(tǒng)FBS中含有大量外泌體,，可能干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果，特別是在干細(xì)胞研究,、腫瘤微環(huán)境分析及外泌體相關(guān)實(shí)驗(yàn)中,。蘇州千舍生物科技有限公司推出的無(wú)外泌體特級(jí)胎牛血清（Exosome-Free FBS）,，通過(guò)超高速離心結(jié)合納米過(guò)濾技術(shù)，有效去除外泌體,，確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性,。

關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)：

高純度：外泌體去除率>99%，避免外源性RNA,、蛋白質(zhì)干擾

高穩(wěn)定性：批次間差異極小,，適用于長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)

低內(nèi)毒素：<1 EU/mL，減少細(xì)胞毒性風(fēng)險(xiǎn)

1,、培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),，如何去除血清來(lái)源的外泌體？    

多數(shù)情況下,，細(xì)胞在體外培時(shí)養(yǎng)需要血清,，而血清中一般都含有外泌體，為避免血清對(duì)細(xì)胞外泌體的污染,，可采用以下兩種方法： （1）將細(xì)胞培養(yǎng)用的血清通過(guò)100000 g超速離心10h以去除血清外泌體； （2）選擇無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),。  

2,、無(wú)外泌體血清培養(yǎng)基（或者無(wú)血清培養(yǎng)基）在什么時(shí)候使用？    

細(xì)胞在正常含血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一定的時(shí)間后,，細(xì)胞融合度約為60%-70%時(shí),，移去原有含血清的培養(yǎng)基，換成新鮮的無(wú)外泌體血清培養(yǎng)基（或者無(wú)血清培養(yǎng)基）,，繼續(xù)培養(yǎng)24-48h,，細(xì)胞融合度達(dá)到80%-95%左右時(shí)收取上清，該上清液即可用于提取外泌體,。   

3,、細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的死細(xì)胞是否會(huì)影響外泌體的提取,？    會(huì)的,。在收獲細(xì)胞時(shí)，應(yīng)確定死亡細(xì)胞占比不超過(guò)5%,。細(xì)胞凋亡/死亡過(guò)程中會(huì)釋放大量大小不等的囊泡,，它們?cè)谕饷隗w的提取純化過(guò)程中會(huì)污染活細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體。  

4,、準(zhǔn)備做細(xì)胞外泌體Small RNA的NGS測(cè)序,，初始樣品量需要準(zhǔn)備多少？    普通腫瘤細(xì)胞系推薦使用40mL以上的初始樣品量,。由于某些細(xì)胞（如懸浮細(xì)胞,、干細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等）中外泌體含量比較低，建議先通過(guò)10kD超濾柱濃縮,，準(zhǔn)備40mL以上的濃縮液再進(jìn)行超速離心分離外泌體,，一般需提取到20ng以上的Total RNA。  

5,、進(jìn)行外泌體RNA RT-PCR實(shí)驗(yàn)推薦什么內(nèi)參,？    取決于具體樣品，可以選擇外源添加cel-miR-39-3p,，或內(nèi)源U6,、SNORD61、SNORD68,、SNORD72作為內(nèi)參,。    

6、提取的外泌體進(jìn)行Western blot前是否需要加入RIPA試劑裂解,？    需要,，一般按照1:1的比例加入RIPA試劑。  

7,、進(jìn)行外泌體Western blot鑒定時(shí)有無(wú)內(nèi)參蛋白可供選擇,？    無(wú)，該檢測(cè)屬于定性檢測(cè),，更多的是用等蛋白定量校準(zhǔn)樣品間的差異,。

8、組織細(xì)胞外泌體如何提??？    無(wú)菌環(huán)境下將組織剪成小塊（越小越好），然后在無(wú)血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)12h,；將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心管中,，于4℃以3000g離心20 min去除培養(yǎng)液中雜質(zhì)和細(xì)胞碎片，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中,；先使用0.45μm濾器過(guò)濾上清液,，接著使用0.2μm濾器過(guò)濾上清液，再進(jìn)行超速離心分離外泌體,。有條件的話(huà)建議采用Transwell小室培養(yǎng)的方式,，效果更佳。    

9,、如何鑒定提取的外泌體,？     

 通常使用透射電鏡檢測(cè)（形態(tài)）、粒徑檢測(cè)（大?。?、Western blot檢測(cè)等方法鑒定提取的外泌體,。在進(jìn)行Western blot檢測(cè)時(shí)，通常檢測(cè)外泌體標(biāo)志蛋白（CD63,、CD9,、CD81、TSG101等）,，按照國(guó)際細(xì)胞外囊泡協(xié)會(huì)的建議為檢測(cè)2個(gè)陽(yáng)性和1個(gè)陰性指標(biāo),。

10、粘度過(guò)大的樣品如何處理,？    如果樣品粘度過(guò)大時(shí)（因細(xì)胞分泌物較多所致）,，可將樣品用1×PBS緩沖液進(jìn)行等體積稀釋。

11,、外泌體電鏡是不是一定要有膜結(jié)構(gòu),？

 負(fù)染電鏡結(jié)果中外泌體的形態(tài)是那種明顯的茶托樣，邊緣有一圈略微更明亮的亮圈,。如果結(jié)構(gòu)是沒(méi)有膜結(jié)構(gòu)的圓球形,，很可能是脂蛋白顆粒或者抱團(tuán)的蛋白質(zhì),。    

12,、分離外泌體前能加RNA保護(hù)劑嗎？    分離外泌體前的樣品不能加入任何RNA保護(hù)劑（如Trizol）,。