無外泌體胎牛血清|WINSERA現(xiàn)貨
在細胞培養(yǎng)實驗中,,胎牛血清(FBS)一直是不能缺少的營養(yǎng)補充劑,。然而,,傳統(tǒng)FBS中含有大量外泌體,,可能干擾實驗結果,特別是在干細胞研究,、腫瘤微環(huán)境分析及外泌體相關實驗中,。蘇州千舍生物科技有限公司推出的無外泌體特級胎牛血清(Exosome-Free FBS),通過超高速離心結合納米過濾技術,,有效去除外泌體,,確保實驗數(shù)據(jù)的準確性和可重復性。
貨號: FBS050-EXO
規(guī)格:50ML
品牌:WINSERA
關鍵優(yōu)勢:
高純度:外泌體去除率>99%,,避免外源性RNA,、蛋白質(zhì)干擾
高穩(wěn)定性:批次間差異極小,適用于長期實驗
低內(nèi)毒素:<1 EU/mL,,減少細胞毒性風險
外泌體的分離方法這么多,,選擇哪種更好?
答:外泌體的分離純化一直是科研工作者關注的問題,,獲得高純度的外泌體對后續(xù)的研究至關重要,。據(jù)了解,目前人們多采用超速離心,、免疫磁珠,、 超濾、 沉淀或試劑盒等方法實現(xiàn)外泌體的提取分離:
1,、 超速離心法(差速離心)超離法是常用的外泌體純化手段,,采用低速離心、高速離心交替進行( 如圖所示) ,,可分離到大小相近的囊泡顆粒,。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,,但過程比較費時,,且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關),純度也受到質(zhì)疑;此外,,重復離心操作還有可能對囊泡造成損害,,從而降低其質(zhì)量。
2,、密度梯度離心在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,,是一種區(qū)帶分離法,。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體將在 1.13-1.19g/ml
的密度范圍富集,。此法獲得的外泌體純度較高,,但步驟繁瑣,耗時,。
3,、超濾離心由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質(zhì),,利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,,便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效,,且不影響外泌體的生物活性,,是提取細胞外泌體的一種新方法。
4,、磁珠免疫法外泌體表面有其特異性標記物(如 CD63,、 CD9 蛋白),用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合,,即可將外泌體吸附并分離出來,。磁珠法具有特異性高、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,,但是效率低,外泌體生物活性易受 pH 和鹽濃度影響,,不利于下游實驗,,難以廣泛普及。
5,、PEG-base 沉淀法聚乙二醇( PEG)可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結合共沉淀,,早先應用于從血清等樣本中收集病毒,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,,其原理可能與競爭性結合游離水分子有關,。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多( 假陽性),顆粒大小不均一,,產(chǎn)生難以去除的聚合物,,機械力或者吐溫-20 等化學添加物將會破壞外泌體等,因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑,。
6,、 試劑盒提取近幾年來,市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,,有的是通過特殊設計的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分,,有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進行分離純化,也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來,。
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