案例說(shuō)明

適用于黃連配方顆粒中生物堿（表小檗堿,、黃連堿,、巴馬汀和鹽酸小檗堿）的含量測(cè)定,。

黃連配方顆粒試樣經(jīng)甲醇-鹽酸溶液超聲提取后,，使用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，在等度條件下進(jìn)行分離,，鹽酸小檗堿在345nm處有紫外吸收,，采用一測(cè)多評(píng)的方式進(jìn)行定量。

分析條件

色譜柱：Kromasil 100-5-C18,，4.6x250mm （訂貨號(hào)：M05CLA25）

流動(dòng)相：（A）乙腈        （B）0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（50:50）（每100mL中加十二烷基硫酸鈉0.4g,，再以磷酸調(diào)節(jié)pH值為4.0）

流速：1.0mL/min

進(jìn)樣量：10μL

柱溫：30℃

波長(zhǎng)：345nm

分析圖譜

3.1

按照上述色譜條件（5.2）進(jìn)行采集，鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液（濃度為81.853

μg/mL）的色譜圖如圖1所示,，積分結(jié)果如表1所示,。

表1鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液色譜圖積分結(jié)果

由表1中可知，鹽酸小檗堿的理論塔板數(shù)為14933,，滿(mǎn)足《黃連（黃連）配方顆?！分宣}酸小檗堿峰的理論塔板數(shù)不低于5000的要求。

將鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣7針,，疊加的色譜圖如圖2所示,，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣7針重復(fù)性數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣7針重復(fù)性測(cè)試,，保留時(shí)間的RSD為0.016%,，峰面積的RSD為0.524%

3.2 含量測(cè)定:

3.2.1 校準(zhǔn)曲線(xiàn)

將配制好的鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)工作液（3.9）在HPLC上進(jìn)行測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo),，以峰面積為縱坐標(biāo),，繪制校準(zhǔn)曲線(xiàn)，線(xiàn)性方程及相關(guān)系數(shù)見(jiàn)圖4,，疊加色譜圖見(jiàn)圖5,。小檗堿在測(cè)定濃度范圍內(nèi)，曲線(xiàn)的相關(guān)系數(shù)R2達(dá)到0.9995,，線(xiàn)性關(guān)系良好,。

3.2.2 含量計(jì)算

購(gòu)買(mǎi)黃連配方顆粒作為樣品，按照5.1的流程對(duì)樣品進(jìn)行處理,，并根據(jù)樣品的含量,，對(duì)樣品進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。按照公式（1）進(jìn)行計(jì)算,，樣品的色譜圖及樣品加標(biāo)的色譜圖如圖6及圖7,。

      ----公式（1）

式中：

ω-----為樣品中小檗堿的含量，單位為毫克每克（mg/g）,；

C----為通過(guò)校準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算的樣品中小檗堿濃度,，單位為微克每毫升（μg/mL）；

V----為樣品的定容體積,，單位為毫升（mL）,；

m----為樣品質(zhì)量，單位為克（g）。

樣品中表小檗堿,、黃連堿,、巴馬汀的定量采用一測(cè)多評(píng)的方式，用對(duì)照品鹽酸小檗堿的含量進(jìn)行定量,，計(jì)算系數(shù)為1,。表小檗堿、黃連堿,、巴馬汀,、小檗堿的峰位，利用待測(cè)成分色譜峰與鹽酸小檗堿色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間進(jìn)行確定,，實(shí)測(cè)以上四種物質(zhì)的相對(duì)保留時(shí)間見(jiàn)表4,。

表4待測(cè)成分的相對(duì)保留時(shí)間

由表4可以看出，四種物質(zhì)的相對(duì)保留時(shí)間均在標(biāo)準(zhǔn)要求的±5%之內(nèi),。

經(jīng)計(jì)算,，此黃連配方顆粒樣品中小檗堿的含量為140.8mg/g，加標(biāo)回收率為102.7%,，表小檗堿,、黃連堿、巴馬汀的總量為102.2mg/g,。

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