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葡聚糖凝膠色譜柱是一種廣泛應(yīng)用于生物化學(xué),、分子生物學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的分離技術(shù)工具,，以葡聚糖凝膠作為固定相,，基于分子篩分原理,，通過不同大小和性質(zhì)的分子在凝膠介質(zhì)中的滲透性差異實(shí)現(xiàn)分離,。其核心優(yōu)勢(shì)在于操作簡(jiǎn)便,、分離效率高,，尤其適用于蛋白質(zhì),、核酸,、多糖等生物大分子的純化與分析。
葡聚糖凝膠顆粒具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),，網(wǎng)孔大小可控,。當(dāng)樣品溶液通過色譜柱時(shí)，大分子因無(wú)法進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部,，僅能沿顆粒間隙流動(dòng),，路徑短、流速快,，優(yōu)先被洗脫,；小分子可進(jìn)入顆粒內(nèi)部，路徑長(zhǎng),、流速慢,，后被洗脫。
葡聚糖凝膠色譜柱的特點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：
一,、凝膠特性
親水性
葡聚糖凝膠具有很強(qiáng)的親水性,，這使得它在水溶液環(huán)境中能夠很好地膨脹并保持水分。在分離過程中,，蛋白質(zhì)等生物大分子能夠在這種親水環(huán)境中保持其天然構(gòu)象和活性,，有利于對(duì)生物樣品的分離和分析。
多孔性
凝膠內(nèi)部呈現(xiàn)多孔結(jié)構(gòu),，這些孔隙大小有一定的分布范圍,。不同型號(hào)的葡聚糖凝膠，其孔隙大小不同,，可以根據(jù)需要選擇合適的型號(hào)來分離不同分子量的物質(zhì),。例如，Sephadex G-25型號(hào)的葡聚糖凝膠,，它的排阻極限（即不能進(jìn)入凝膠內(nèi)部而被分離的物質(zhì)的最小分子量）約為5000Da,，主要用于分離分子量較小的物質(zhì)，如氨基酸,、核苷酸等,；而Sephadex G-200型號(hào)則用于分離分子量較大的蛋白質(zhì)等生物大分子。
二,、分離原理及效果
分子篩效應(yīng)
基于分子大小進(jìn)行分離是葡聚糖凝膠色譜柱的核心原理,。當(dāng)含有不同分子量成分的樣品溶液通過凝膠柱時(shí)，小分子物質(zhì)能夠進(jìn)入凝膠內(nèi)部的孔隙,，在孔隙中擴(kuò)散,、滯留，所受到的阻力較大,，因此在柱中的流速相對(duì)較慢,；而大分子物質(zhì)則被排斥在凝膠顆粒之外,，只能在凝膠顆粒之間的空隙中流動(dòng)，所受阻力較小,，流速較快,。這樣，不同大小的分子就可以按照分子量大小的順序依次從柱中流出,，實(shí)現(xiàn)分離,。
高分辨率分離
能夠有效地分離分子量差異較小的物質(zhì)。由于其精細(xì)的孔隙結(jié)構(gòu)和良好的分子篩性能,，對(duì)于分子量相近的蛋白質(zhì),、多肽等生物分子也能達(dá)到較好的分離效果。
三,、化學(xué)穩(wěn)定性和兼容性
化學(xué)穩(wěn)定性好
葡聚糖凝膠具有較高的化學(xué)穩(wěn)定性,，在較寬的pH范圍內(nèi)（一般可耐受pH 4-10的范圍）都能保持其結(jié)構(gòu)和性能的穩(wěn)定,。這使得它可以用于多種不同的緩沖液體系,，適應(yīng)不同類型的生物樣品的分離需求。
良好的生物兼容性
對(duì)生物大分子具有較好的兼容性,，一般不會(huì)與生物樣品發(fā)生化學(xué)反應(yīng)或吸附作用,，從而保證了分離過程的可靠性和準(zhǔn)確性。這一特點(diǎn)使得它在生物化學(xué),、分子生物學(xué)等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用,，用于蛋白質(zhì)、核酸,、激素等生物大分子的分離純化,。
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