1. 生化試劑盒的測定原理,？

生化試劑盒通過化學(xué)反應(yīng)/酶促反應(yīng)或物質(zhì)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)測定樣本中物質(zhì)含量或酶活,；所用儀器一般為分光光度計和酶標(biāo)儀，兩者的測定原理都是 朗伯比耳定律: A=kbc,，即當(dāng)適當(dāng)波長的一束平行單色光照射固定濃度均勻溶液時,，其吸光度與光通過的液層厚度成正比。土壤、水質(zhì),、動植物組織,、血清、細(xì)胞細(xì)菌,、食品等 樣本均可以進(jìn)行測定,。

2. 如何選擇不同規(guī)格的試劑盒？

首先根據(jù)本實(shí)驗(yàn)的實(shí)際情況選擇,，實(shí)驗(yàn)室有酶標(biāo)儀的且有該檢測波長的可以選擇微量法試劑盒,；實(shí)驗(yàn)室有分光光度計的，且有相應(yīng)規(guī)格的比色皿既 可以選擇常量法也可選擇微量法試劑盒,。建議購買前先閱讀的說明書,，對其中自備的儀器和試劑進(jìn)行確認(rèn)。

3. 收到試劑盒后如何保存,？

如果收到試劑盒,，暫時不用，可按照外包裝上指示的溫度統(tǒng)一保存,；拆開包裝后,，請按照每個試劑的保存溫度進(jìn)行保存，有些試劑忌反復(fù)凍融,； 有些試劑為粉劑,，溶解之后性質(zhì)不穩(wěn)定。

4. 試劑盒的有效期是多長,？

一般生化試劑盒有效期為6個月,，也有特殊貨號生化試劑盒有效期為1年；具體以實(shí)際收到貨物的標(biāo)簽信息為準(zhǔn),。

5. 收到試劑盒后應(yīng)該從哪一步做起,？

強(qiáng)烈建議客戶先拿出2-3個預(yù)期結(jié)果差別較大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)的過程中,，首先將試劑盒中的說明書通讀一遍,， 檢查試劑盒中各成分的量與說明書符不符合，溶解或使部分試劑回復(fù)至室溫,，然后處理樣本,，樣本提取完成后，再溶解一些粉劑,，開始實(shí)驗(yàn),。

6. 買了多個試劑盒，樣本只有很少可以只用一種提取液提取嗎,？

一般同一個系列的試劑盒中,，酶活測定的提取液類似，含量測定的提取液類似。但具體的請具體查詢,。

7. 待測樣本必須是鮮樣的嗎,？冷凍樣本是否可以用？

新鮮樣本和冷凍樣本都可用于大多數(shù)指標(biāo)的測定,，有一些生理活性物質(zhì)容易降解,，建議用新鮮樣本測定， 如輔酶Ⅰ,、輔酶Ⅱ,、谷胱甘肽、線粒體復(fù)合體等,。冷凍樣本建議在-70℃或者液氮中保存,。一般樣本在4度能都 保存一周，-20保存一個月,，-80保存3個月

8. 土壤酶活性測定可以用鮮土嗎,？

由于土壤顆粒大小不一致導(dǎo)致水分含量不一樣，且取樣量較少,，為了保證測定的重復(fù)性，建議將鮮土風(fēng)干并 過篩后取樣,。若用鮮土測定,，需保證樣本的顆粒大小一致水分含量相似，建議過40目篩后取樣,，且同時測定 的樣本要保持一致,，最好不要一組樣本用風(fēng)干土，一組用鮮土,，風(fēng)干后的土樣在-20保存1個月測定大部分酶活 幾乎不會有損失,；某些土壤的成分如硝態(tài)氮、銨態(tài)氮等在風(fēng)干過程中會發(fā)生顯著變化,，必須用新鮮樣品進(jìn)行分析,。

9. 樣本研磨的方法？

樣本研磨我們一般用到三種方法：

第一種：將研缽置于冰盒上勻漿即冰浴勻漿,，在勻漿的過程中注意勻漿器浸于冰中,，防止因?yàn)槟Σ烈鸬臏囟冗^高，提取液可以在勻漿過程中或者勻漿后加入,。

第二種：用液氮勻漿,，液氮研磨前將樣本洗凈，盡量剪成小塊,，放入研缽中,，加入液氮研磨，液氮揮散后盡快加入第二次液氮直至研磨成粉末狀，避免其過程中 反復(fù)凍融,，同時要做好保護(hù)措施,，防止凍傷手指。完成后將粉末收集到離心管中加入緩沖液,。樣本可以提前稱量號也可研磨完后稱量,。

第三種：使用勻漿機(jī)進(jìn)行勻漿，將稱好的組織放入離心管中,，加入適量提取液,，加入鋼珠。并將模塊提前遇冷,，按照機(jī)器指示進(jìn)行操作,。一般的動物組織用 該方法效果尚可，有些機(jī)器對植物組織的處理效果不好,。

10. 測定前是如何調(diào)零,？

使用分光光度計的用戶，用蒸餾水或相應(yīng)的有機(jī)試劑直接調(diào)零,。使用酶標(biāo)儀的用戶,，可以在一個孔里加入200μL的蒸餾水或去離子水，作為調(diào)零孔,， 也可不用調(diào)零,，后續(xù)計算中會有空白孔。

11. 樣本如何稀釋或濃縮,？

樣本測定值若超出檢測范圍,，可以將提取的上清液用提取液稀釋后重新測定。一般從高到低,，按照2倍,，5倍，10倍,，20倍的順序,，選擇一個合適的稀釋 倍數(shù)。樣本測定值若低于檢測范圍,，可以提高樣本濃度,，如稱取0.2g樣本加入1mL提取液勻漿，相當(dāng)于將樣本濃縮2倍,。

12. 如何保證測定溫度,？

（1）、根據(jù)說明書中定測定溫度,，提前打開保溫設(shè)備（如水浴鍋）,，設(shè)到定溫度,，在達(dá)到定溫度后，把冷藏的試劑轉(zhuǎn)移到保溫設(shè)備中保溫10-30分鐘以上,，以保證反應(yīng)一開始,，就在定溫度中進(jìn)行。

（2）,、對于擁有酶標(biāo)儀的用戶,，直接提前預(yù)熱，在達(dá)到設(shè)定溫度后,，可以直接把預(yù)熱后的試劑,，加入酶標(biāo)板，然后開始反應(yīng),。

（3）,、在保溫設(shè)備（水浴鍋和金屬浴，最好是前者）進(jìn)行,。注意提前對保溫設(shè)備進(jìn)行預(yù)熱,，達(dá)到設(shè)定溫度后再進(jìn)行反應(yīng)。但是僅適用于能夠終止的反應(yīng),。

（4）,、對于瞬間完成的反應(yīng)，或者對溫度不敏感的反應(yīng),，為了提高重復(fù)性,，最好在同一溫度下完成檢測。例如打開空調(diào),，設(shè)定在室溫,，如25℃,。 當(dāng)然,，所有控溫設(shè)備，都要進(jìn)行預(yù)熱,。

13,、試劑盒有哪些常見規(guī)格？

（1）,、50管的試劑盒,，常量法試劑盒，用分光光度計檢測,。1mL的比色皿檢測,。

（2）、100管的試劑盒,，微量法試劑盒,，用酶標(biāo)儀（酶標(biāo)板）或者分光光度計（0.25 mL比色皿）檢測,。

14. 試劑盒規(guī)格中是什么意思？

（1）,、50T/48S：50T指能夠做50次測定,，48S指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復(fù)測定3次,，那么只能測定16個樣品,。其中有2次測定用于空白管或者 對照管。值得特別注意的是,，50T/24S中由于每個樣品測定都需要做對照,，因此能夠測定樣品的數(shù)量僅為8個（假設(shè)做3次重復(fù)）

（2）、100T/96S：100T指能夠做100次測定,，96S指可以測定96個樣品,，如果每個樣品重復(fù)測定3次，那么只能測定32個樣品,。其中有4次測定用于空白管或 者對照管,。 注意由于瓶璧和移液器吸附等，通常要比理論測定次數(shù)少1~3次,。其它規(guī)格的含義依次類推,。值得特別注意的是，100T/48S中由于每個樣品測 定都需要做對照,，因此能夠測定樣品的數(shù)量僅為16個（假設(shè)做3次重復(fù)）,。

15. 試劑盒中含有干粉的試劑應(yīng)該怎么稀釋保存？

一般試劑為粉劑的,，可能更多的考慮到配成溶液后的穩(wěn)定性差,，如NADH，或者和其他試劑溶解在一起會在不同的溫度下有其他的化學(xué)反應(yīng)如MnCl2,。 -20℃保存的粉劑建議溶解后分裝保存,，避免反復(fù)凍融。