耗材專區(qū) | Empore™ C18 96孔板在肽段脫鹽過程中的應(yīng)用
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Empore™ C18 96孔板簡介
Empore™ C18膜式固相萃取96孔板專為高通量固相萃取而設(shè)計,,板的每個孔內(nèi)都有一個有效直徑為5.5mm的C18固相萃取膜,固相萃取膜和其上方的預(yù)過濾層被壓環(huán)固定到每個孔的底部,,預(yù)過濾層可有效提高大多數(shù)生物樣品前處理流速,。有效直徑是指可用于樣品處理的萃取膜實際使用直徑,。標準板的單孔儲液體積為1.2mL,,深孔板的單孔儲液體積為2.5mL。如果樣品或試劑的體積超過板的單孔儲液體積,,可分批次加液,。
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Empore™ C18 96孔板技術(shù)優(yōu)勢
高通量、低樣本損失,、兼容自動化設(shè)備,。 致密且穩(wěn)定的膜結(jié)構(gòu)消除了散裝填料孔板中存在的溝流和孔洞的問題,數(shù)據(jù)重現(xiàn)性更高,。 薄薄的膜結(jié)構(gòu)更易被洗脫,,回收率更高。
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C18 96孔板脫鹽原理
C18鍵合相(十八烷基硅烷)通過疏水相互作用吸附肽段,,去除鹽分,、去垢劑等雜質(zhì),隨后用有機溶劑洗脫肽段,,實現(xiàn)脫鹽和濃縮,。
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實驗前準備
CDS Empore™ C18 96孔板(貨號:70-2007-3982-2EA,,規(guī)格:6015 C18-SD PLATE, 1.2mL, 1PCS) -
緩沖液:
活化/平衡液:0.1%三氟乙酸(TFA)水溶液;
洗滌液:0.1% TFA/5%乙腈(ACN);
真空抽濾裝置或離心機(適配96孔板) 肽段樣本(酶解后的復(fù)雜混合物)
2、板預(yù)處理
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活化:每孔加入200μL 100% ACN,,靜置1分鐘,,抽干,。
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平衡:每孔加入200μL 0.1% TFA,重復(fù)2次,,確保填料親水化,。
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脫鹽步驟
將肽段樣本(溶于0.1% TFA)加入孔中,。 注意:樣本pH需≤3(TFA調(diào)節(jié)),,以增強肽段與C18的結(jié)合。
每孔加入200μL洗滌液(0.1% TFA/5% ACN),,重復(fù)2-3次,去除鹽分和極性雜質(zhì),。 真空抽干或離心去除液體,。
加入50-100μL洗脫液(如0.1% TFA/50% ACN),,靜置1分鐘,,收集洗脫液至收集板。 可重復(fù)洗脫1次以提高回收率,。
合并洗脫液,真空離心干燥(如SpeedVac)后溶于質(zhì)譜上樣緩沖液(如0.1%甲酸),。
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關(guān)鍵參數(shù)優(yōu)化
手動操作時避免流速過快(依賴重力或離心);自動化平臺可調(diào)至1mL/ min,。
洗脫ACN濃度需優(yōu)化(通常50-80%),過高可能導(dǎo)致疏水性雜質(zhì)共洗脫,。
避免超載(肽段載量:100μg左右/孔),否則會導(dǎo)致回收率低,。
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應(yīng)用場景
去除LC-MS/MS樣本中的鹽(如SDS、尿素,、磷酸鹽),。
與高pH反相分餾聯(lián)用,,提高肽段覆蓋度,。
適配液體處理工作站(如Labtech EmporeOmics、Tecan,、Hamil-ton) 實現(xiàn)高通量,。
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