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耗材專區(qū) | Empore™ C18 96孔板在肽段脫鹽過程中的應(yīng)用

來源:北京萊伯泰科儀器股份有限公司   2025年04月11日 10:48  
前言
在蛋白質(zhì)組學研究中,,C18 96孔板被廣泛應(yīng)用于肽段脫鹽和純化步驟,尤其適用于高通量樣本處理,為下游質(zhì)譜分析提供高質(zhì)量樣本。

 

 

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Empore™ C18 96孔板簡介

 

耗材專區(qū) | Empore™ C18 96孔板在肽段脫鹽過程中的應(yīng)用

Empore™ C18膜式固相萃取96孔板專為高通量固相萃取而設(shè)計,,板的每個孔內(nèi)都有一個有效直徑為5.5mm的C18固相萃取膜,固相萃取膜和其上方的預(yù)過濾層被壓環(huán)固定到每個孔的底部,,預(yù)過濾層可有效提高大多數(shù)生物樣品前處理流速,。有效直徑是指可用于樣品處理的萃取膜實際使用直徑,。標準板的單孔儲液體積為1.2mL,,深孔板的單孔儲液體積為2.5mL。如果樣品或試劑的體積超過板的單孔儲液體積,,可分批次加液,。

耗材專區(qū) | Empore™ C18 96孔板在肽段脫鹽過程中的應(yīng)用

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Empore™ C18 96孔板技術(shù)優(yōu)勢

 

  • 高通量、低樣本損失,、兼容自動化設(shè)備,。
  • 致密且穩(wěn)定的膜結(jié)構(gòu)消除了散裝填料孔板中存在的溝流和孔洞的問題,數(shù)據(jù)重現(xiàn)性更高,。
  • 薄薄的膜結(jié)構(gòu)更易被洗脫,,回收率更高。

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C18 96孔板脫鹽原理

 

C18鍵合相(十八烷基硅烷)通過疏水相互作用吸附肽段,,去除鹽分,、去垢劑等雜質(zhì),隨后用有機溶劑洗脫肽段,,實現(xiàn)脫鹽和濃縮,。

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實驗前準備

 

1、材料與試劑
  • CDS Empore™ C18 96孔板(貨號:70-2007-3982-2EA,,規(guī)格:6015 C18-SD PLATE, 1.2mL, 1PCS)
  • 緩沖液:

活化/平衡液:0.1%三氟乙酸(TFA)水溶液;

洗滌液:0.1% TFA/5%乙腈(ACN);

洗脫液:0.1% TFA/50-80% ACN(或70% ACN/0.1%甲酸),。
  • 真空抽濾裝置或離心機(適配96孔板)
  • 肽段樣本(酶解后的復(fù)雜混合物)

2、板預(yù)處理

  • 活化:每孔加入200μL 100% ACN,,靜置1分鐘,,抽干,。

  • 平衡:每孔加入200μL 0.1% TFA,重復(fù)2次,,確保填料親水化,。

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脫鹽步驟

 

1、上樣

 

  • 將肽段樣本(溶于0.1% TFA)加入孔中,。
  • 注意:樣本pH需≤3(TFA調(diào)節(jié)),,以增強肽段與C18的結(jié)合。

 

2,、洗滌

 

  • 每孔加入200μL洗滌液(0.1% TFA/5% ACN),,重復(fù)2-3次,去除鹽分和極性雜質(zhì),。
  • 真空抽干或離心去除液體,。

 

3、洗脫

 

  • 加入50-100μL洗脫液(如0.1% TFA/50% ACN),,靜置1分鐘,,收集洗脫液至收集板。
  • 可重復(fù)洗脫1次以提高回收率,。

 

4,、干燥

 

  • 合并洗脫液,真空離心干燥(如SpeedVac)后溶于質(zhì)譜上樣緩沖液(如0.1%甲酸),。

 

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關(guān)鍵參數(shù)優(yōu)化

 

1,、流速控制

 

  • 手動操作時避免流速過快(依賴重力或離心);自動化平臺可調(diào)至1mL/ min,。

 

2,、有機相比例

 

  • 洗脫ACN濃度需優(yōu)化(通常50-80%),過高可能導(dǎo)致疏水性雜質(zhì)共洗脫,。

 

3,、樣本載量

 

  • 避免超載(肽段載量:100μg左右/孔),否則會導(dǎo)致回收率低,。

 


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應(yīng)用場景

 

1,、質(zhì)譜前處理

 

  • 去除LC-MS/MS樣本中的鹽(如SDS、尿素,、磷酸鹽),。

 

2、分級洗脫

 

  • 與高pH反相分餾聯(lián)用,,提高肽段覆蓋度,。

 

3、自動化整合

 

  • 適配液體處理工作站(如Labtech EmporeOmics、Tecan,、Hamil-ton) 實現(xiàn)高通量,。

 

 

 

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