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耗材專區(qū) | Empore™ C18 96孔板在肽段脫鹽過(guò)程中的應(yīng)用

來(lái)源：北京萊伯泰科儀器股份有限公司 2025年04月11日 10:48

前言

在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，C18 96孔板被廣泛應(yīng)用于肽段脫鹽和純化步驟,，尤其適用于高通量樣本處理,，為下游質(zhì)譜分析提供高質(zhì)量樣本。

Empore™ C18 96孔板簡(jiǎn)介

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Empore™ C18膜式固相萃取96孔板專為高通量固相萃取而設(shè)計(jì),，板的每個(gè)孔內(nèi)都有一個(gè)有效直徑為5.5mm的C18固相萃取膜,，固相萃取膜和其上方的預(yù)過(guò)濾層被壓環(huán)固定到每個(gè)孔的底部，預(yù)過(guò)濾層可有效提高大多數(shù)生物樣品前處理流速,。有效直徑是指可用于樣品處理的萃取膜實(shí)際使用直徑,。標(biāo)準(zhǔn)板的單孔儲(chǔ)液體積為1.2mL，深孔板的單孔儲(chǔ)液體積為2.5mL,。如果樣品或試劑的體積超過(guò)板的單孔儲(chǔ)液體積,，可分批次加液。

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Empore™ C18 96孔板技術(shù)優(yōu)勢(shì)

高通量,、低樣本損失,、兼容自動(dòng)化設(shè)備。
致密且穩(wěn)定的膜結(jié)構(gòu)消除了散裝填料孔板中存在的溝流和孔洞的問(wèn)題,，數(shù)據(jù)重現(xiàn)性更高,。
薄薄的膜結(jié)構(gòu)更易被洗脫，回收率更高,。

C18 96孔板脫鹽原理

C18鍵合相（十八烷基硅烷）通過(guò)疏水相互作用吸附肽段,，去除鹽分、去垢劑等雜質(zhì),，隨后用有機(jī)溶劑洗脫肽段,，實(shí)現(xiàn)脫鹽和濃縮。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1,、材料與試劑

CDS Empore™ C18 96孔板（貨號(hào)：70-2007-3982-2EA,，規(guī)格：6015 C18-SD PLATE, 1.2mL, 1PCS）
緩沖液：

活化/平衡液：0.1%三氟乙酸（TFA）水溶液;

洗滌液：0.1% TFA/5%乙腈（ACN）;

洗脫液：0.1% TFA/50-80% ACN（或70% ACN/0.1%甲酸）。

真空抽濾裝置或離心機(jī)（適配96孔板）
肽段樣本（酶解后的復(fù)雜混合物）

2,、板預(yù)處理

活化：每孔加入200μL 100% ACN,，靜置1分鐘，抽干,。
平衡：每孔加入200μL 0.1% TFA,，重復(fù)2次，確保填料親水化,。

脫鹽步驟

1,、上樣

將肽段樣本（溶于0.1% TFA）加入孔中,。
注意：樣本pH需≤3（TFA調(diào)節(jié)），以增強(qiáng)肽段與C18的結(jié)合,。

2,、洗滌

每孔加入200μL洗滌液（0.1% TFA/5% ACN），重復(fù)2-3次,，去除鹽分和極性雜質(zhì),。
真空抽干或離心去除液體。

3,、洗脫

加入50-100μL洗脫液（如0.1% TFA/50% ACN）,，靜置1分鐘，收集洗脫液至收集板,。
可重復(fù)洗脫1次以提高回收率,。

4、干燥

合并洗脫液,，真空離心干燥（如SpeedVac）后溶于質(zhì)譜上樣緩沖液（如0.1%甲酸）,。

關(guān)鍵參數(shù)優(yōu)化

1、流速控制

手動(dòng)操作時(shí)避免流速過(guò)快（依賴重力或離心）,；自動(dòng)化平臺(tái)可調(diào)至1mL/ min,。

2、有機(jī)相比例

洗脫ACN濃度需優(yōu)化（通常50-80%）,，過(guò)高可能導(dǎo)致疏水性雜質(zhì)共洗脫,。

3、樣本載量

避免超載（肽段載量：100μg左右/孔）,，否則會(huì)導(dǎo)致回收率低,。

應(yīng)用場(chǎng)景

1、質(zhì)譜前處理

去除LC-MS/MS樣本中的鹽（如SDS,、尿素、磷酸鹽）,。

2,、分級(jí)洗脫

與高pH反相分餾聯(lián)用，提高肽段覆蓋度,。

3,、自動(dòng)化整合

適配液體處理工作站(如Labtech EmporeOmics、Tecan,、Hamil-ton) 實(shí)現(xiàn)高通量,。

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