Leica FSC22 3801480 冷凍包埋劑科研應用指南

——實現(xiàn)高質(zhì)量冷凍切片的關(guān)鍵基質(zhì)

一,、產(chǎn)品核心特性與原理

1.1 化學組成與功能優(yōu)勢

水溶性聚合物基質(zhì)：

主要成分：聚乙烯醇（PVA）與羧甲基纖維素復合物

無石蠟/無OCT化合物,，避免 冷凍偽影 和 冰晶形成

關(guān)鍵參數(shù)：

熔點 -25℃（適配常規(guī)冷凍切片機）

粘度 350±50 cP（25℃，確保均勻滲透）

水溶性（后續(xù)染色無殘留干擾）

1.2 與傳統(tǒng)包埋劑對比

特性 Leica FSC22 OCT化合物 石蠟

冷凍速度 快（<2分鐘） 中等（5分鐘） 不適用

抗原保存率 >95% ~80% <50%

切片厚度下限 2 μm 5 μm 3 μm

1.3 適用樣本類型

推薦應用：

? 脆弱組織（如胚胎,、腦組織）

? 需免疫熒光（IF）或原位雜交（FISH）的樣本

? 脂質(zhì)豐富樣本（避免有機溶劑溶解）

二,、標準化操作流程

2.1 包埋前處理

組織預處理：

復制

1. 4% PFA固定后，用PBS沖洗3×5分鐘  

2. 梯度蔗糖脫水（10%-20%-30%,，各2小時）  

3. 吸干表面液體  

2.2 包埋步驟

復制

1. 模具預冷：-20℃金屬模具中注入少量FSC22,，預凍1分鐘  

2. 組織定向：將樣本置于模具中央，滴加FSC22覆蓋  

3. 快速冷凍：  

  - 直接放入液氮蒸氣相（-80℃）10秒  

  - 或置于預冷異戊烷（-50℃）中30秒  

4. 儲存：-80℃密封保存（避免反復凍融）  

2.3 切片優(yōu)化參數(shù)

條件 推薦設(shè)置

切片機溫度 -18℃至-22℃

刀片角度 5°

切片速度 0.8-1.2 mm/s

三,、質(zhì)量評估與問題排查

3.1 切片質(zhì)量診斷

合格標準：

? 切片完整無碎裂（邊緣光滑）

? 厚度均勻（CV<5%,，顯微測厚儀驗證）

? 無冰晶空洞（40倍鏡檢）

3.2 常見問題解決方案

現(xiàn)象 可能原因 優(yōu)化方案

切片卷曲 包埋劑溫度過高 模具預冷延長至2分鐘

組織分層 增加蔗糖濃度至40%

染色背景高 包埋劑殘留 延長PBS沖洗至10分鐘

3.3 應用案例數(shù)據(jù)

案例1：小鼠腦切片（免疫熒光）

結(jié)果對比：

復制

FSC22組：NeuN信號強度比OCT組高30%  

OCT組：非特異性背景染色顯著  

案例2：脂肪肝樣本

脂滴保留率：

FSC22：98% intact

常規(guī)冷凍：70-80%

四、技術(shù)問答（Q&A）

Q1：能否用于-80℃長期儲存,？

可儲存 6個月（需密封防潮）,，但建議 -20℃ 保存以維持粘度

Q2：與抗體滲透性關(guān)系？

因無疏水屏障,，抗體滲透速度比石蠟快 3倍（實測IgG達深層組織僅需1小時）

文檔增強建議：

插入 【包埋流程示意圖】（標注關(guān)鍵溫度控制點）

添加 切片厚度驗證方法 視頻鏈接

關(guān)鍵步驟用 ??警示框 強調(diào)（如"避免氣泡混入"）