鐵（分子量55.845克/摩爾）是一種在所有已知生物體的各種代謝過程中都不可少的元素,。其中最重要的過程包括電子傳遞、氧氣運輸和DNA合成,。鐵最常見的存在形式是鐵-硫中心和各種血紅素,。與其他大多數(shù)通過吸收和排泄來調節(jié)水平的離子不同，體內的鐵水平僅通過吸收過程來控制,。AkrivisBio的鐵檢測試劑盒是一種簡單直接的方法,，用于測定樣本中的亞鐵離子（Fe2?）。在檢測中,，樣本中存在的鐵化合物可以選擇性地被還原為亞鐵形式（Fe2?）,，然后與FereneS反應生成一個在593納米處具有最大吸收峰的穩(wěn)定色素。通過添加一種添加劑來防止銅的干擾,。該檢測適用于多種樣本中鐵含量在0到10納摩爾范圍內的測定,。

艾美捷鐵測定試劑盒：

貨號：MA-0103

規(guī)格：100孔

樣本類型：細胞或組織裂解液、血清

適用物種：通用（適用于所有物種）

檢測方法：比色法,，檢測波長593納米

檢測類型：定量

應用：基于微孔板的比色法檢測,，用于測量樣本中鐵含量（0-10納摩爾）。

檢測范圍：0-10納摩爾

儲存條件：+4°C

運輸條件：凝膠冷藏包

鐵測定試劑盒檢測組分：

-檢測緩沖液：25毫升,，貨號WMMA-0103A

-鐵還原劑：0.7毫升,，綠色，貨號MA-0103B

-FereneS：12毫升,，貨號NMMA-0103C

-Fe3?標準品（100mM）：0.1毫升,，黃色，貨號MA-0103D

鐵測定試劑盒檢測原理：

1.鐵化合物被溶解,，使所有Fe2?和Fe3?都可用,。Cu2?被螯合以去除干擾。

2.可選擇性地添加還原劑將Fe3?轉化為Fe2?（總鐵）或省略（僅還原鐵,，Fe2?）,。

3.添加FereneS形成色素。

儲存和處理：

將試劑盒儲存于4°C,。使用前將所有組分恢復至室溫?；旌翔F還原劑以溶解在冷凍過程中可能形成的任何沉淀,。打開試劑瓶前請短暫離心。

檢測步驟：

1.鐵標準曲線：將10微升100mM的鐵標準品用990微升去離子水稀釋,，生成1mM的鐵標準品,。將稀釋后的鐵標準品0、2,、4,、6、8和10微升分別加入96孔板中，生成每孔0,、2,、4、6,、8和10納摩爾的鐵標準品,。向每個標準品孔中加入5微升鐵還原劑，并用鐵檢測緩沖液將所有標準品孔的體積調整至100微升,。

2.樣本測試：

-a.可以直接測試液體樣本（如血清）中的亞鐵（Fe2?）,、總鐵（Fe2?+Fe3?）或鐵（Fe3?）。每孔最多可加入50微升血清,。正常血清中鐵水平約為10-40微摩爾,。軟組織或細胞可以用5-10倍體積的鐵檢測緩沖液（例如，每100毫克濕組織或約5×10?細胞用500微升鐵檢測緩沖液）進行勻漿,。用探針超聲儀或Dounce玻璃珠勻漿器充分勻漿組織樣本,，然后以16,000×g離心10分鐘，將上清液轉移至新的微量離心管中,。所有最終讀數(shù)應在標準曲線范圍內,。如果任何樣本超出該范圍，應適當稀釋并重新運行,。

-b.僅檢測亞鐵（Fe2?）：將1-50微升樣本加入96孔板的樣本孔中,，并用鐵檢測緩沖液將體積調整至每孔100微升。檢測總鐵（Fe2?+Fe3?）：將1-50微升樣本加入96孔板的樣本孔中,。向每個樣本中加入5微升鐵還原劑,，將Fe3?還原為Fe2?。用鐵檢測緩沖液將體積調整至每孔100微升,。

-c.在37°C下,，讓Fe3?w全還原為Fe2?，持續(xù)30分鐘,。

-d.向含有鐵標準品和測試樣本的每個孔中加入100微升鐵探針,。充分混合。在37°C下,，避光讓顏色w全顯色,，持續(xù)60分鐘。

3.測量：在微孔板讀數(shù)器上監(jiān)測593納米處的吸光度,。

4.典型結果：

5.計算：從所有其他標準品和樣本讀數(shù)中減去零標準品的讀數(shù),。繪制標準曲線。確定標準曲線的斜率,。將背景校正后的樣本讀數(shù)除以標準曲線的斜率,，以獲得每孔中的鐵納摩爾數(shù),。測試樣本中的Fe2?和總鐵（Fe2?+Fe3?）直接從標準曲線確定。測試樣本中的Fe3?含量通過從總鐵（Fe2?+Fe3?）中減去Fe2?來計算,。通過以下方法確定原始樣本中的Fe2?,、Fe3?或總鐵（Fe2?+Fe3?）濃度：

-A.將每孔的納摩爾數(shù)除以加入孔中的樣本體積（微升）=每微升樣本中的鐵納摩爾數(shù)

-B.將每微升樣本中的鐵納摩爾數(shù)乘以上述2a中上清液的總體積=每樣本中的總鐵納摩爾數(shù)

-C.將每樣本中的總鐵納摩爾數(shù)除以用于制備樣本的組織毫克數(shù)或細胞數(shù)量=每毫克組織（或每細胞數(shù)量等）中的鐵納摩爾數(shù)