農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)活動中應(yīng)用廣泛,，主要用于兩個方面,，即 生產(chǎn)和為方便運輸進行的農(nóng)產(chǎn)品處理,。而被限制使用 的農(nóng)藥是主要用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的農(nóng)藥,。因此,，農(nóng)藥最大 殘留量 (MRLs) 與食品的安全評價有著緊密的聯(lián)系,。近年來建立的 MRLs 相關(guān)法規(guī)日趨嚴(yán)格。日本在 2006 年出臺了肯定列表制度 (Positive list system),，對食 品中 500 余種農(nóng)藥的 MRLs 作了規(guī)定,。這一制度針 對不同農(nóng)藥，按不同食品規(guī)定了不同的 MRLs,。 通常,，根據(jù)商品和農(nóng)藥種類的不同，MRLs 在 0.01 到 3 µg/g 不等,。MRLs 的降低對儀器的靈敏度提出 了更高的要求,，促使儀器不斷發(fā)展以滿足復(fù)雜樣品的 要求。迄今,，帶有多反應(yīng)監(jiān)測模式 (MRM) 高 效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng) (LC/MS/MS) 是食品中極 性農(nóng)藥定量分析常用的工具,。MRM 模式能夠?qū)κ?品這樣的復(fù)雜基質(zhì)進行更精確的檢測。本文在所用樣 品分析條件下分兩次分析了 44 種農(nóng)藥（見表 1 和表 2）,，其靈敏度能夠很輕易地達到肯定列表制度的相應(yīng) 要求,。

實驗部分 化學(xué)試劑 乙腈（LC/MS 級純）購自 Wako Pure Chemical Ind. （日本）。 正己烷,，甲酸,，氯化鈉和無水 硫酸鈉均為分析純,，購自 Wako Pure Chemical Ind. （日本）。SPE 柱購自 Spelco Japan（日本）,。各農(nóng)藥 標(biāo)準(zhǔn)品購自 Hayashi Pure Chemical（日本）,。

樣品制備 提取 蔬菜和水果樣品均來自本地市場。用食品加工機將 10-500 g 不等的樣品切碎,，獲得混合的勻漿液,。 稱量 20 g 的樣品勻漿液倒入 200 mL 的 PTFE 離心 管中，加入 50 mL 乙腈在 Polytoron 混合器中混勻,。 將乙腈提取物抽真空過濾,，收集濾液。濾渣再以 20 mL 乙腈提取,。重復(fù)上述操作后合并濾液,，倒入 100 mL 容量瓶中，加入乙腈定容,。取出 20 mL 提取物倒入 PTFE 離心管中,，加入 10 g NaCl 和 20 mL 磷酸鹽緩 沖液 (pH 7.0)，振搖 5 分鐘,。鹽析后得乙腈層,，向其 中加入 5 克無水硫酸鈉。去除無水硫酸鈉后,，使用旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在 40 °C 下將乙腈提取物蒸干,。殘渣以 2 mL 乙腈－甲苯 (3:1) 溶解。

純化 第一組－將提取物上樣到經(jīng) 10 mL 乙腈－甲苯 (3:1) 平衡過的 GCB/氨丙基 SPE 柱 (500 ng/500 mg) 上,。 以 20 mL 的乙腈－甲苯 (3:1) 沖洗,。收集洗脫液，以 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干溶劑,。殘渣以 4 mL 甲醇溶解,。 第二組－將提取物上樣到經(jīng)甲醇、丙酮,、正己烷各 10 mL 依次平衡過的硅膠 SPE 柱 (500 mg) 上,。以 10 mL 的丙酮-三乙胺-正己烷 (20:0.5:80) 洗脫。棄去 洗脫液,。再以 20 mL 丙酮-甲醇 (1:1) 沖洗,，收集洗 脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干溶劑,。殘渣以 4 mL 甲醇溶解

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 配制 1 µg/mL 的各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的甲醇溶液,，以甲醇 逐級稀釋得 0.001-1 µg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)混合液。 空白基質(zhì)殘渣中加入混合農(nóng)藥,，濃度為 10 ng/g,。

LC/MS/MS 儀器 LC/MS/MS 系統(tǒng)包括 Agilent 1100 系列的真空脫氣 機,，二元泵，自動進樣器,，柱溫箱和 Agilent G6410 型三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜,，離子源是 ESI 源。本研究的 目的是建立一種快速靈敏測定水果和蔬菜中農(nóng)藥殘留 量的分析方法,。為了獲得良好的色譜分辨率和靈敏度,， 需要首先優(yōu)化流動相組成和選擇合適的色譜柱。優(yōu)化 結(jié)果為：流動相采用水-乙腈-甲酸-甲酸銨體系,，色譜 柱采用 1.8 µm 粒徑填料的 C18 柱,。

LC 條件 儀器： Agilent 1100 HPLC 色譜柱： ZORBAX Extend C18, 100 mm x 2.1 mm,  1.8 µm (部件號728700-902) 柱溫： 40 oC  流動相： A = 0.1% 甲酸 +5 mM 甲酸銨水溶液 B= 乙腈 洗脫梯度： 起始 10% B，at 30 min 80% B 流速： 0.2 mL/min  進樣量： 5 µL MS 條件設(shè)置 儀器： Agilent 6410三重串聯(lián)四極桿系統(tǒng)） 離子源： ESI 正離子模式 干燥氣流速： 10 L/min 霧化器： 50 psig 干燥氣溫度： 350 oC  Vcap: 4000 V 離子掃描范圍： m/z 100-550  碰撞電壓： 100 V 可調(diào) MRM 離子： 見表 1 和表 2 碰撞能量： 見表 1 和表 2

LC/MS/MS 方法 以 MRM 模式按時間程序進行定量分析,。MRM transition 參數(shù)見表 1 和表 2,。

結(jié)果與討論 MRM transition 條件的優(yōu)化 對含 1 µg/mL 的兩個農(nóng)藥的混合物標(biāo)準(zhǔn)溶液依次進 行全掃描模式和子離子掃描模式的檢測，獲得各個農(nóng) 藥的最佳 MRM transition 參數(shù),。兩種模式的總離子 流圖 (TIC) 見圖 1 和圖 2,。在全掃描模式的質(zhì)譜圖中， 除了 azinphos-methyl,，呋線威和氟磺胺草醚的基峰 離子是 [M+NH4]+ 之外,，其余農(nóng)藥的基峰離子都是 [M+H]+,。選擇這些基峰離子作為母離子進行 MRM 模 式監(jiān)測,。采用多重采集 (multiple acquisition) 和時 間程序模式，可以得到不同農(nóng)藥的個體子離子 MS/MS 圖譜,。從表 1 和表 2 中可以看出,，第一組的 33 種農(nóng)藥和第二組的 11 種農(nóng)藥分別以 10 個和 7 個 時間段進行 MRM 模式監(jiān)測。 圖 3 是最小 MRL 濃度水平 (10 ng/mL) 的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn) 混合液的 TIC 譜圖,。圖中所有的農(nóng)藥都顯示了信噪比 (S/N),。以 MRM 模式分析 1 ng/mL 各農(nóng)藥 溶液（結(jié)果見表 3），按照信噪比 S/N=3 確定各農(nóng)藥 的檢出限 (LOD),。同時,，分析 0.001-1 ng/mL 的各農(nóng) 藥標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制定量標(biāo)準(zhǔn)曲線,，評價其線性,。表 3 數(shù)據(jù)顯示，所有農(nóng)藥的線性相關(guān)系數(shù) r2 都大于 0.998,。 為了考察基質(zhì)對方法的影響,，本文選取柑桔、蘋果,、 馬鈴薯和卷心菜為基質(zhì),。向各自的提取物中分別加入 10 ng/mL 的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品后進行分析,。圖 4 和圖 5 是 柑桔提取物的 MRM 圖譜，其他提取物的分析結(jié)果見 圖 6,。通過與農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)混合液的圖譜比較,，可以看出， 基質(zhì)的成分對農(nóng)藥的檢測沒有干擾,。這表明,，MRM 模式具有很高的選擇性。