鎳是地殼中最為常見的金屬元素之一,，僅次于鐵。  

許多酶利用鎳作為活性位點的一部分,，包括單核（如甘油醛酶I,、超氧化物歧化酶）,、雙核（如脲酶）或更復雜的異核簇（如幾種氫化酶和脫氫酶）。我們利用鎳與含有巰基的化合物形成絡合物的能力,，這些化合物在紫外/可見光區(qū)域具有吸收帶,。AkrivisBio的鎳檢測試劑盒是一種簡單、靈敏的方法,，可用于定量檢測多種樣本類型中的Ni²⁺,。由于其他離子也表現(xiàn)出與含硫化學物質相似的行為，因此采用差分吸光度法來校正干擾物質,。

艾美捷鎳比色測定試劑盒：

貨號：MA-0134

規(guī)格：100孔

樣本類型：包括細胞和組織培養(yǎng)上清液,、尿液、血漿,、血清以及許多其他生物液體在內(nèi)的多種樣本,。

檢測方法：比色法，吸光度330納米和405納米

檢測類型：定量檢測

應用：一種基于微孔板的簡單、靈敏的比色法檢測方法,，用于在多種樣本中定量檢測Ni2?,，線性檢測范圍為樣本中2-50納摩爾鎳。

靈敏度：樣本中鎳的線性檢測范圍為2-50納摩爾,。

儲存條件：室溫

運輸溫度：室溫

保質期：自發(fā)貨之日起一年

鎳比色測定試劑盒檢測原理：

在硼酸鹽緩沖液中,，鎳與巰基乙醇形成絡合物，在330納米處產(chǎn)生強烈的吸收帶,。如果存在鐵和/或鈷,，它們也會在330納米和405納米處表現(xiàn)出差分吸收，這些吸收用于校正它們的影響,。鎂,、銅和鋅不會產(chǎn)生干擾。

檢測試劑：

-檢測緩沖液：20毫升  

-鎳試劑：1毫升（綠色）  

-氯化鎳：1毫升（黃色）  

儲存和處理：

-檢測緩沖液和鎳試劑：即用型,，室溫保存,。  

-鎳標準品：以1毫摩爾/升溶液形式提供，即用型,，室溫保存。

檢測步驟：

1. 標準曲線：在96孔板的一系列孔中分別加入0,、10,、20、30,、40,、50微升鎳標準品。用檢測緩沖液將所有孔的體積調(diào)整至200微升,。標準品濃度分別為0,、10、20,、30,、40、50納摩爾鎳,。

2. 樣本準備：鎳的濃度可能變化范圍較廣,。加入10-100微升每個樣本，并用檢測緩沖液將所有測試孔的體積調(diào)整至200微升,。樣本讀數(shù)應位于標準曲線范圍內(nèi),。如果任何樣本超出該范圍，適當稀釋并重新檢測,。  

注意：如果樣本中沒有或極少含有鐵或鈷污染,，只需在405納米處讀取吸光度。如果樣本中預期含有鐵或鈷，需在加入鎳試劑之前和之后,，分別在330納米和405納米處讀取樣本吸光度,。

3. 讀取1：在加入鎳試劑之前，讀取樣本和標準品在330納米和405納米處的吸光度,。任何吸光度僅由Fe2?和/或試劑背景引起,。將這些測量值分別記作OD3301和OD4051。

4. 絡合物形成：向所有標準品和樣本孔中加入10微升鎳試劑,，允許30分鐘用于絡合物形成和顏色發(fā)展,。

5. 讀取2：再次讀取所有樣本和標準品在330納米和405納米處的吸光度。將這些測量值分別記作OD3302和OD4052,。

6. 在沒有鐵或鈷離子的情況下測定鎳：從405納米處的讀取2（OD4052）中減去405納米處的讀取1（OD4051）,。繪制標準曲線。確定標準曲線的斜率（OD/納摩爾）,。將樣本的ΔOD405（OD4052 - OD4051）除以標準曲線的斜率,，以確定鎳的納摩爾數(shù)。

7. 在存在鐵和/或鈷的情況下測定鎳：從所有標準品和樣本讀數(shù)中減去0鎳的OD讀數(shù),。

- a. 校正330納米處因鐵引起的干擾：在沒有巰基乙醇的情況下,，330納米處的吸光度（OD3301）僅由Fe2?貢獻。加入含有巰基乙醇的鎳試劑后,，Fe2?對OD3302的貢獻按以下方式計算：計算OD3302 = 1.82 × OD3301,。從總測量的OD3302中減去因鐵導致的計算OD3302值，以獲得因鎳和鈷導致的校正OD330,。

- b. 校正405納米處因鐵引起的干擾：在沒有巰基乙醇的情況下,，405納米處的吸光度（OD4051）僅由鐵貢獻。加入含有巰基乙醇的鎳試劑后,，鐵對OD4052的貢獻可以按以下方式計算：計算OD4052 = 1.65 × OD4051,。從總測量的OD4052讀數(shù)中減去因鐵導致的計算OD4052值，以獲得僅因鎳和鈷導致的校正OD405讀數(shù),。

- c. 校正因鈷導致的干擾：計算校正后的OD330和OD405的比值 =（校正后的OD330/校正后的OD405）,。該比值將從100%鈷貢獻吸光度時的0.925變化到100%鎳貢獻時的2.8125。從校正后的讀數(shù)比值中減去0.925,，并將該結果除以1.8875,，{[（OD330/OD405）- 0.925)]/1.8875}。這就是因鎳導致的吸光度百分比,。將該百分比乘以校正后的OD330,，以獲得樣本中OD3302處的孤立鎳吸光度。

8.計算：繪制標準曲線（ΔOD405或ΔOD330）,。確定標準曲線的斜率,。計算步驟6中沒有鐵或鈷的樣本的樣本鎳讀數(shù)ΔOD405,，或步驟7中有鐵和/或鈷干擾的樣本的校正OD330。將校正后的樣本鎳讀數(shù)除以標準曲線的斜率,，以確定孔中鎳的納摩爾數(shù),。