區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞是在研究細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控機(jī)制以及細(xì)胞死亡機(jī)制和途徑時(shí)常見且非常重要的任務(wù),。  

AkrivisBio的即用型試劑讓這一過程變得簡(jiǎn)單,。我們結(jié)合了一種專有的細(xì)胞可滲透的綠色熒光染料來染色活細(xì)胞,，以及一種紅色非滲透性染料——碘化丙啶（propidium iodide）,，用于染色所有細(xì)胞,。染色后的細(xì)胞可以通過熒光顯微鏡進(jìn)行觀察,。試劑盒提供了足夠用于4片24孔板的材料,。

艾美捷活細(xì)胞與死細(xì)胞區(qū)分染色試劑盒：

貨號(hào)：COS-0103

規(guī)格：包含用于染色4片24孔板的試劑。

樣本類型：貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞

適用物種：所有

檢測(cè)方法：熒光顯微鏡

檢測(cè)類型：定性檢測(cè)

應(yīng)用：用于對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行染色,，以便在熒光顯微鏡下方便地區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞,。

儲(chǔ)存條件：-20°C

運(yùn)輸溫度：冰凝膠包運(yùn)輸

保質(zhì)期：自發(fā)貨之日起一年

活細(xì)胞與死細(xì)胞區(qū)分染色試劑盒成分：

-活細(xì)胞染料：50微升，綠色（COS-0103-A）  

-全細(xì)胞染料：50微升,，紅色（碘化丙啶,，COS-0103-B）  

-染色緩沖液：50毫升（COS-0103-C）  

儲(chǔ)存和穩(wěn)定性：

未開封的試劑盒應(yīng)儲(chǔ)存于-20°C。染色緩沖液和全細(xì)胞染料（碘化丙啶）開封后可在4°C下儲(chǔ)存,?；罴?xì)胞染料應(yīng)始終儲(chǔ)存于-20°C。

染色步驟：

1. 根據(jù)要染色的孔數(shù)準(zhǔn)備足夠的染色液,。每個(gè)孔需要0.5微升活細(xì)胞染料,、0.5微升全細(xì)胞染料和0.5毫升染色緩沖液,。根據(jù)實(shí)驗(yàn)規(guī)模相應(yīng)調(diào)整體積。  

2. 通過輕柔離心（500×g,，5分鐘）收集細(xì)胞（10?個(gè)）,。移除并丟棄上清液。  

3. 加入500微升染色液,，輕輕重懸細(xì)胞沉淀,。  

4. 在37°C下孵育15分鐘。  

5. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到載玻片上,，并用蓋玻片覆蓋細(xì)胞懸液,。放置在顯微鏡載物臺(tái)上進(jìn)行觀察。  

注意：對(duì)于貼壁細(xì)胞,，可以直接在蓋玻片上培養(yǎng),。染色時(shí)，傾斜并移除培養(yǎng)基,，然后放平,，加入0.5毫升染色液并孵育15分鐘。將蓋玻片倒置在載玻片上,，放置在顯微鏡載物臺(tái)上,。  

6. 使用能夠檢測(cè)熒光素和羅丹明的帶通濾光片（排除較短波長(zhǎng)）的熒光顯微鏡立即觀察細(xì)胞。  

-活細(xì)胞會(huì)被細(xì)胞可滲透的活細(xì)胞染料染成綠色熒光（激發(fā)波長(zhǎng)488納米,；發(fā)射波長(zhǎng)518納米）,。  

-死細(xì)胞染料會(huì)將活細(xì)胞和死細(xì)胞都染成紅色（激發(fā)波長(zhǎng)488納米；發(fā)射波長(zhǎng)615納米）,，從而呈現(xiàn)出黃色-紅色的混合外觀,。  

注意：不同細(xì)胞類型的染色條件有所不同，因此需要手動(dòng)調(diào)整條件以找到兩種染料的合適濃度,。碘化丙啶是一種疑似致癌物,，操作時(shí)需格外小心。