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白喉棒狀桿菌毒素ELISA檢測試劑盒通常采用雙抗原夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA），具體操作步驟如下：
一,、檢測原理
通過預先包被白喉棒狀桿菌抗原的微孔板,，依次加入待測樣本,、辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體，經溫育后徹底洗滌，加入底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶催化下轉化為藍色,，最終在酸作用下變?yōu)辄S色，通過酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，與CUTOFF值比較,，判定樣本中白喉棒狀桿菌毒素抗體的存在。
二,、操作步驟
樣本準備
血清/血漿：收集后3000轉離心10分鐘分離血清或血漿,，避免溶血和高脂樣本。
保存條件：若不立即檢測,，樣本需分裝后凍存于-20℃,，避免反復凍融,，室溫解凍并充分混勻,。
試劑準備
試劑盒平衡：試劑盒于2-8℃保存，使用前室溫平衡20分鐘,。
洗滌液稀釋：濃縮洗滌液用蒸餾水按1:20或1:50稀釋（根據試劑盒說明）,。
加樣與溫育
設置對照孔：陰、陽性對照孔各加入50μL對照液,。
樣本孔：加入50μL稀釋后的樣本,。
加入檢測抗體：每孔加入100μLHRP標記的檢測抗體，封板膜封住反應孔,，37℃水浴或恒溫箱溫育60分鐘,。
洗滌
棄去液體，每孔加滿洗滌液,，靜置1分鐘后甩去,，重復5次（或用洗板機洗滌）。
顯色與終止
每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15分鐘。
每孔加入50μL終止液,，15分鐘內于450nm波長測定OD值,。
三,、結果判斷
試驗有效性
陽性對照孔OD值平均值≥1.00，陰性對照孔OD值平均值≤0.15,。
臨界值計算
臨界值（Cutoff）=陰性對照孔平均值+0.15,。
結果判定
陰性：樣本OD值<臨界值。
陽性：樣本OD值>臨界值,。
四,、注意事項
操作規(guī)范
實驗中不用的板條應立即放回自封袋密封保存。
所有液體組分使用前需充分搖勻,，避免產生氣泡,。
安全防護
避免直接接觸終止液和底物A、B,，若接觸需立即用水沖洗,。
實驗中禁止吃喝、抽煙或使用化妝品,。
儀器與設備
需配備450nm酶標儀,、高精度加樣器及槍頭、37℃恒溫箱,。
試劑保存
試劑盒僅供研究使用,，不得用于臨床實驗或人體實驗。
試劑盒需2-8℃避光防潮保存,，嚴格按照說明書操作,。
五、試劑盒優(yōu)勢
高敏感性與特異性：歐盟CE認證,，不與其他可溶性結構類似物交叉反應,。
操作簡便：即用型試劑，適用于手動或自動化檢測系統(tǒng),。
臨界值質控：提供質控品,，確保檢測結果準確可靠。
六,、應用領域
疾控中心,、科研實驗室、醫(yī)院等機構用于白喉棒狀桿菌毒素抗體的檢測,，輔助白喉疾病的診斷與流行病學調查,。
通過上述方法，可高效,、準確地檢測樣本中白喉棒狀桿菌毒素抗體的存在,，為白喉的防控提供科學依據
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