IgE檢測(cè)試劑盒是一種高度敏感的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）,，用于檢測(cè)小鼠生物樣本中的IgE,。如果ELISA用于超出預(yù)期用途的其他用途,，用戶(hù)可能需要針對(duì)該用途進(jìn)行優(yōu)化,。

艾美捷小鼠IgE ELISA試劑盒（#E-90E）雙抗體夾心ELISA原理：

在此檢測(cè)中,，樣本中存在的IgE與吸附在聚苯乙烯微量滴定板孔表面的抗IgE抗體發(fā)生反應(yīng)。經(jīng)過(guò)洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后,，加入與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）結(jié)合的抗IgE抗體。這些酶標(biāo)記的抗體與之前結(jié)合的IgE形成復(fù)合物,。經(jīng)過(guò)另一次洗滌步驟后,，通過(guò)加入顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來(lái)檢測(cè)與免疫吸附劑結(jié)合的酶,。結(jié)合的酶量與樣本中IgE的濃度成正比,；因此,，450 nm處的吸光度是測(cè)試樣本中IgE濃度的衡量指標(biāo),?？梢酝ㄟ^(guò)從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（由標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建）中插值得到測(cè)試樣本中IgE的量,，并根據(jù)樣本稀釋情況進(jìn)行校正,。

樣本采集與處理：

所有血液成分和生物材料都應(yīng)被視為潛在危險(xiǎn)品,。在處理和丟棄時(shí)應(yīng)遵循普遍預(yù)防措施,。

如果血液樣本凝固,、嚴(yán)重溶血,、乳糜血或樣本完整性受到質(zhì)疑，請(qǐng)做好記錄,，并謹(jǐn)慎解讀結(jié)果,。

以下樣本采集和儲(chǔ)存條件僅供參考,。樣本穩(wěn)定性尚未經(jīng)過(guò)評(píng)估。

血清樣本：通過(guò)靜脈穿刺采集血液,。血凝塊形成后,，通過(guò)離心將血清與細(xì)胞分離,。立即進(jìn)行檢測(cè)，或分裝后將樣本儲(chǔ)存于–80°C（優(yōu)先）或–20°C。避免反復(fù)凍融,。

血漿樣本：將血液采集到含有抗凝劑的容器中,，然后離心,。立即進(jìn)行檢測(cè)，或分裝后將樣本儲(chǔ)存于–80°C（優(yōu)先）或–20°C,。避免反復(fù)凍融,。

尿液樣本：使用無(wú)菌或干凈的尿液收集器采集中段尿,。離心去除細(xì)胞碎片,。立即進(jìn)行檢測(cè),，或分裝后將樣本儲(chǔ)存于–80°C（優(yōu)先）或–20°C。避免反復(fù)凍融,。

已知干擾物：濃度高于0.1%的疊氮化物和硫柳汞會(huì)抑制酶反應(yīng),。

樣本稀釋：

檢測(cè)要求每個(gè)測(cè)試樣本在使用前必須進(jìn)行稀釋,。每次進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，所有樣本都應(yīng)進(jìn)行雙份檢測(cè),。推薦的稀釋倍數(shù)僅供參考。稀釋倍數(shù)應(yīng)根據(jù)未知樣本的預(yù)期濃度來(lái)確定,，使稀釋后的樣本落在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi),。如果不確定樣本水平,，在運(yùn)行整個(gè)板之前，建議先用一兩個(gè)代表性樣本進(jìn)行系列稀釋,。

血清樣本：推薦起始稀釋倍數(shù)為1/50。要制備1/50稀釋液,，將5 uL樣本轉(zhuǎn)移到245 uL 1X稀釋液中,。充分混合,。

血漿樣本：推薦起始稀釋倍數(shù)為1/50,。要制備1/50稀釋液，將5 uL樣本轉(zhuǎn)移到245 uL 1X稀釋液中,。充分混合,。

試劑準(zhǔn)備：

在使用前將所有試劑恢復(fù)至室溫（16°C至25°C）,。

稀釋液濃縮液：提供的稀釋液為5X濃縮液,，必須用蒸餾水或去離子水稀釋1/5（1份緩沖液濃縮液,，4份水）,。

洗滌液濃縮液：提供的洗滌液為20X濃縮液,，必須用蒸餾水或去離子水稀釋1/20（1份緩沖液濃縮液，19份水）,。如果儲(chǔ)存溫度較低,，濃縮液中可能會(huì)形成晶體。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解晶體,。

酶-抗體結(jié)合物：根據(jù)每個(gè)微量滴定板測(cè)試條的需要計(jì)算所需的工作結(jié)合物溶液量。對(duì)于每個(gè)用于測(cè)試的測(cè)試條,，將10 uL酶-抗體結(jié)合物加入990 uL 1X稀釋液中,。使用前立即稀釋并避光保存。均勻混合,，但動(dòng)作輕柔。避免起泡,。

預(yù)包被的ELISA微量滴定板：按供應(yīng)狀態(tài)即可使用,。打開(kāi)鋁箔袋，取出板,。將不會(huì)用于檢測(cè)的測(cè)試條和孔取下,，放回袋中，并與干燥劑一起重新密封,。

小鼠IgE校準(zhǔn)品：根據(jù)批次特定的分析證書(shū)進(jìn)行準(zhǔn)備,。

結(jié)果計(jì)算：

1. 從每個(gè)樣本的測(cè)試值中減去平均背景值（標(biāo)準(zhǔn)零的平均吸光度讀數(shù)）。

2. 對(duì)每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的雙份讀數(shù)取平均值,，并用結(jié)果構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),。通過(guò)使用能夠生成四參數(shù)邏輯曲線(xiàn)擬合的計(jì)算機(jī)軟件來(lái)處理數(shù)據(jù)，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),。也可以使用二階多項(xiàng)式（二次）或其他曲線(xiàn)擬合,，但它們對(duì)數(shù)據(jù)的擬合精度較低。

3. 從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上插值得到測(cè)試樣本值,。根據(jù)血清稀釋因子進(jìn)行校正,，以得到原始樣本中的IgE濃度。