小鼠原代免疫細胞的精準基因編輯可直接操控免疫關(guān)鍵分子，實現(xiàn)功能與信號通路的快速驗證,，在保留細胞生理特性的同時避免了耗時的轉(zhuǎn)基因動物構(gòu)建,。然而，這一研究利器長期受困于技術(shù)瓶頸——傳統(tǒng)的慢病毒,、電穿孔和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染系統(tǒng)在遞送 Cas9/sgRNA 核糖核蛋白（Cas9-RNP）復合物時效率低下,，且嚴重損傷細胞活力,。西湖凝聚體與西湖大學聯(lián)合開發(fā)的 ProteanFect CRISPRMax Ultra 小鼠免疫細胞轉(zhuǎn)染試劑盒,，通過創(chuàng)新的生物分子凝聚體技術(shù)，遞送 sgRNA 與重組 Cas9 蛋白 RNP 進入小鼠免疫細胞并實現(xiàn)高效基因編輯,，為免疫學研究提供了突破性解決方案,。同時，整個過程簡單高效,，且無需 sgRNA-Cas9 提前孵育,，使原代免疫細胞轉(zhuǎn)染像 HEK293 細胞系一樣容易！

ProteanFect CRISPRMax Ultra 基因編輯機制

ProteanFect 遞送系統(tǒng)實現(xiàn)基因編輯的分子機制如下（圖1）：

1,、Cas9 蛋白,、sgRNA與 ProteanFect 內(nèi)源蛋白一起組裝成為 Cas9 RNP-凝聚體復合物；

2,、Cas9 RNP 通過 Proteanfect 遞送進入細胞內(nèi),；

3、Cas9 RNP 復合物被 Proteanfect 釋放并進入細胞核與靶 DNA 結(jié)合,；

4,、精準切割靶基因，實現(xiàn)高效基因編輯,。

圖1. ProteanFectCRISPRMax Cas9RNP遞送原理

這種遞送策略極大避免了電穿孔等物理方法對細胞膜的損傷,，以及病毒載體可能引起的免疫原性問題，同時實現(xiàn)了比直接遞送 RNP 蛋白更高的編輯效率,。

ProteanFect CRISPRMax Ultra遞送系統(tǒng)：效率與細胞活性的平衡：

無需預(yù)組裝,，凝聚體作為高效生物反應(yīng)器，制備過程中,，一分鐘之內(nèi)即可完成快速組裝,；

無需入胞后翻譯成蛋白，快速進入后直接進行基因編輯,；

不依賴于持續(xù)激活,，能保持穩(wěn)定的編輯效率；

高效實現(xiàn)小鼠原代T細胞,、NK細胞,、γδ T細胞,、Treg細胞等免疫細胞的基因編輯。

實驗數(shù)據(jù)：小鼠原代T細胞中的超高效基因編輯ProteanFect CRISPR Ultra 小鼠免疫細胞轉(zhuǎn)染試劑盒對小鼠原代 T 細胞進行基因編輯：采用 TracsgRNA/Cas9 RNP 轉(zhuǎn)染的方案,，結(jié)果如下圖1所示,。基因組水平檢測（圖2左）顯示小鼠 T 細胞整體 Trac 敲除率達83.5%,，蛋白水平檢測（圖2右）顯示 Trac 敲除效率達93.0%,。

圖2. 使用ProteanFect CRISPRMax Ultra小鼠免疫細胞轉(zhuǎn)染試劑盒對小鼠原代T細胞進行基因編輯

突破傳統(tǒng)：ProteanFect CRISPRMax Ultra與其他CRISPR方法對比

表1. ProteanFect與傳統(tǒng)CRISPR方法對比

全·球首·創(chuàng)：基于生物分子凝聚體的分子遞送技術(shù)

ProteanFect 凝聚體技術(shù)：ProteanFect CRISPRMax 采用了一種創(chuàng)新的生物分子凝聚體技術(shù)：ProteanFect蛋白分子能夠在體外與核酸、蛋白等自組裝成高度規(guī)律的球體結(jié)構(gòu),，這種自組裝而成的ProteanFect-核酸/蛋白復合物能夠通過細胞的主動攝入高效進入細胞內(nèi),，迅速釋放核酸分子，實現(xiàn)基因表達,，同時天然降解其余蛋白,。

圖3. ProteanFect核酸遞送原理示意圖(以遞送核酸為例)

ProteanFect CRISPR Ultra小鼠免疫細胞轉(zhuǎn)染試劑盒——一步到位的基因編輯解決方案

使用便捷：試劑盒中包含陽性對照，您只需準備sgRNA即可開展實驗

即開即用：所有組分已優(yōu)化配比,，無需繁瑣調(diào)試

高效可靠：標準化流程確保實驗結(jié)果穩(wěn)定可重復

全·程無·憂：提供詳細操作指南和一對一技術(shù)支持

ProteanFect 助您輕松實現(xiàn)小鼠免疫細胞的精準基因編輯,。如需了解更多技術(shù)細節(jié)或產(chǎn)品信息，可聯(lián)系華雅思創(chuàng)生物,。