可溶性酸性轉(zhuǎn)化酶（Soluble acid invertase, S-AI）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

蔗糖轉(zhuǎn)化酶（Invertase,，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,，是高等植物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一,。根據(jù)最適 pH,，Ivr 分為酸性轉(zhuǎn)化酶（AI）和中性轉(zhuǎn)化酶（NI）兩種類型,。

AI 的最適pH 為 3～5,。AI 分為可溶性AI(S-AI)和細(xì)胞壁不溶性AI（B-AI）兩種類型,。S-AI 主要存在于細(xì)胞液泡或自由空間中,，最適 pH 為 4.5~5.0（酸性）,，通過降解液泡中蔗糖，調(diào)節(jié)液泡中蔗糖的利用和果實(shí)內(nèi)糖類的積累,。

測定原理：

S-AI 催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,，進(jìn)一步與 3,5－二硝基水楊酸反應(yīng)，生成棕紅色氨基化合物,，在 510nm有特征光吸收,，在一定范圍內(nèi) 510nm 光吸收增加速率與S-AI 活性成正比。

組成：

試劑二：粉劑×1 瓶,，4℃保存,；臨用前加入 25ml 試劑一充分溶解備用；用不完的試劑 4℃保存;

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì),、臺式離心機(jī),、水浴鍋、移液器、1ml 玻璃比色皿,、研缽,、冰和蒸餾水。

粗酶液提取提?。?/span>

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿,。12000g 4℃離心 10min,，取上清，置冰上待測,。

測定步驟和加樣表：

混勻,， 37℃準(zhǔn)確水浴 30min 后，95℃水浴 10min（蓋緊,，以防水分散失）,，流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變）

混勻，95℃水浴 10min（蓋緊,，以防止水分散失）,，流水冷卻后充分混勻， 510nm 處,，蒸餾水調(diào)零,，記錄各管吸光值 A，如果吸光值大于 2,，可以用蒸餾水稀釋后測定(計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)),，ΔA=A 測定-A 對照

S-AI 活性計(jì)算：

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.0016x -0.001；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/ml）,，y 為吸光值,。

（1） 按蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：37℃每mg 蛋白每分鐘產(chǎn)生 1μg 還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。

S-AI 活性（μg/min/mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr

（2） 按鮮重計(jì)算：

單位的定義：37℃每g 組織每分鐘產(chǎn)生 1μg 還原糖定義為一個(gè)酶活性單位,。

S-AI 活性（μg/min/g 鮮重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =20.8×(ΔA +0.001) ÷W

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積,，0.2ml；V2：加入提取液體積,，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間,，30min,； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml,；W：樣本鮮重,，g。