以下是美天旎(Miltenyi Biotec)MACS組織保存液(假設(shè)為類似產(chǎn)品,如 Tissue Storage Solution 或 樣本保存液)的標(biāo)準(zhǔn)使用方法的詳細(xì)說明,,具體操作需根據(jù)實(shí)際產(chǎn)品名稱和說明書調(diào)整:
一,、產(chǎn)品用途
用于 新鮮組織樣本的短期保存與運(yùn)輸,維持細(xì)胞活性及完整性,,適用于后續(xù)的細(xì)胞分離(如MACS磁珠分選),、流式分析、核酸提取等實(shí)驗(yàn),。
二,、使用步驟
1. 樣本采集與處理
組織處理:
使用無菌器械快速采集目標(biāo)組織(如腫瘤、淋巴結(jié)等),。
將組織切成 3-5 mm3小塊(減少中心缺氧壞死),。
用預(yù)冷的 PBS或生理鹽水 沖洗,去除血液和殘留物,。
2. 浸泡保存液
保存液體積:組織體積與保存液比例為 1:5~1:10(如1g組織需5-10ml保存液),。
操作步驟:
將組織塊浸沒于保存液中。
輕柔搖晃容器,,確保液體充分接觸組織,。
密封容器,標(biāo)注樣本信息(名稱,、日期等),。
3. 保存與運(yùn)輸條件
溫度要求:
短期保存(<24小時(shí)):2-8℃冷藏。
長(zhǎng)期保存(>24小時(shí)):-80℃冷凍(需確認(rèn)保存液是否耐凍),。
運(yùn)輸:使用冰盒或干冰維持低溫,,避免反復(fù)凍融,。
4. 后續(xù)處理
解凍(如冷凍保存):
37℃水浴快速解凍(避免長(zhǎng)時(shí)間高溫)。
解凍后立即用冷PBS清洗組織2-3次,,去除殘留保存液,。
細(xì)胞分離:
按標(biāo)準(zhǔn)流程進(jìn)行組織消化(如膠原酶處理)。
使用美天旎 MACS磁珠分選試劑盒 進(jìn)行目標(biāo)細(xì)胞分離,。
三、注意事項(xiàng)
保存時(shí)間限制:
冷藏保存建議 ≤72小時(shí),,超時(shí)可能影響細(xì)胞活率,。
冷凍保存需驗(yàn)證保存液兼容性(部分含DMSO的保存液適合凍存)。
避免污染:
操作全程保持無菌條件,,保存液開啟后需分裝,,避免多次使用。
組織類型適配性:
實(shí)體器官(肝,、脾)適用性高,;
脂肪或纖維化組織需延長(zhǎng)消化時(shí)間。
保存液成分:
若含蛋白酶抑制劑(如EDTA),,需避免與后續(xù)消化酶沖突,。
四、常見問題解答
Q1: 保存液是否可以替代細(xì)胞凍存液,?
否,。組織保存液主要用于短期維持活性,若需長(zhǎng)期凍存細(xì)胞,,需使用含 DMSO/FBS 的專業(yè)凍存液,。
Q2: 組織保存后細(xì)胞活率下降明顯?
可能原因:
保存溫度波動(dòng)(未嚴(yán)格保持2-8℃),;
組織塊過大導(dǎo)致內(nèi)部缺氧壞死,;
保存時(shí)間超過推薦期限。
Q3: 能否與其他品牌的磁珠分選試劑聯(lián)用,?
需驗(yàn)證兼容性,,建議使用美天旎 MACS Buffer(貨號(hào)130-091-221)清洗樣本,避免殘留保存液影響分選效率,。
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