產(chǎn)品簡介:
紅細(xì)胞(Red blood cell,RBC)也稱紅血球,,是血液中數(shù)量最多的一種血細(xì)胞,,脊椎動物體內(nèi)通過RBC運(yùn)送氧氣,,RBC同時還具有免疫功能,。在貧血檢查中可通過蔗糖水溶血試驗來檢測紅細(xì)胞膜的缺陷,,尤其適用于檢測陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(paroxysmalnocturnal hemoglobinuria,PNH),,該癥為獲得性紅細(xì)胞膜缺陷引起的慢性血管內(nèi)溶血,,常在睡眠時加重,,可伴發(fā)性血紅蛋白尿和全血細(xì)胞減少,。
酸溶血定性檢測試劑盒是利用PNH紅細(xì)胞對補(bǔ)體敏感性增高,在酸化的血清中經(jīng)過37℃孵育,,易溶血,,血清經(jīng)過56℃加熱30min,使補(bǔ)體滅活,,病人紅細(xì)胞不溶解,,該試劑盒主要用于檢測人、動物血液的紅細(xì)胞膜的缺陷,,尤其用于鑒定陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥,。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途,。
自備材料:
1,、生理鹽水
2、與患者同血型的正常新鮮血液
3,、水浴鍋
操作步驟(僅供參考):
1,、制備脫纖維血清:取患者和與患者同血型的正常人靜脈血 5ml,慢慢注入含有3個潔凈玻璃珠的小容器中,,立即輕輕的持續(xù)搖動,,直至纖維蛋白出現(xiàn)并附著于玻璃珠上為止(一 般需要 10~15min)。轉(zhuǎn)移脫纖維血至潔凈離心管,,低速離心,,取上清待用,即為脫纖維血清,。
2,、制備50%紅細(xì)胞懸液:取脫纖維血清,經(jīng)生理鹽水洗滌3次,,每次都應(yīng)顛倒,、混勻、離心,,盡量吸棄上清液,,留下紅細(xì)胞沉淀,加入等體積 PNH NaCl Buffer 重新懸浮紅細(xì)
胞,,即為50%紅細(xì)胞懸液,。
3、取試管6支,,按下表先加入同血型正常人新鮮血清0.5ml,其中 3,、6兩支試管在 56℃
水浴30min,,使補(bǔ)體滅活,,其余4管置于室溫 30min。此后按下表順序操作,。
加入物(ml) | 待測管 | 對照管 | ||||
試管號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
正常人新鮮血清 | 0.5 | 0.5 | — | 0.5 | 0.5 | — |
正常人 56℃滅活血清 | — | — | 0.5 | — | — | 0.5 |
Acidic Buffer | — | 0.05 | 0.05 | — | 0.05 | 0.05 |
50%患者紅細(xì)胞懸液 | 0.05 | 0.05 | 0.05 | — | — | — |
50%正常人紅細(xì)胞懸液 | — | — | — | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
混勻,,置于 37℃水浴中 1h(30min 時輕輕混勻一次),離心,。 | ||||||
陽性結(jié)果(溶血) | ± | 3+ | — | — | — | — |
注意:如果PNH 患者第3管(加正常人滅活血清管)溶血,,則說明此溶血不依賴于補(bǔ)體,故不是PNH,,可能是紅細(xì)胞有其他缺陷(如球形紅細(xì)胞增多癥),,應(yīng)做進(jìn)一步鑒別。
參考區(qū)間:正常人無溶血,。
注意事項:
1,、 所用器具必須潔凈干燥,以免溶血造成假陰性,。
2,、 血清酸化后應(yīng)注意密閉保存,盡快檢測,,避免CO2逸出導(dǎo)致血清酸度降低,,影響溶血程度。
3,、 如果患者多次輸血,,其血液中的不正常細(xì)胞會相應(yīng)減少,可呈弱陽性或陰性,。出現(xiàn)這種情況應(yīng)延長孵育時間至 4~6h,,再觀察溶血情況。
4,、 該實驗可作為PNH的過篩實驗,,陰性可排除 PNH,陽性應(yīng)做酸化溶血實驗證實,。
有效期:6個月有效,。
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