普諾賽細(xì)胞學(xué)堂 | 外泌體分離不再難,!普諾賽®四大試劑盒全面解析
文章來源:procell
外泌體作為細(xì)胞間通訊的重要介質(zhì),,其高純度,、高回收率的分離對下游功能分析,、組學(xué)檢測及疾病診斷至關(guān)重要,。然而,,傳統(tǒng)外泌體提取方法往往面臨設(shè)備要求高,、操作流程復(fù)雜等挑戰(zhàn),。為此,普諾賽®針對性開發(fā)了多種分離方案,,以滿足不同樣品類型與研究需求,。
在上期細(xì)胞學(xué)堂中,我們梳理了常用的外泌體分離方法,,本期我們將進(jìn)一步聚焦普諾賽®推出的四款外泌體分離試劑盒,,詳細(xì)解析其核心原理、操作流程,、注意事項及優(yōu)勢,,助力您挑選最-適合的產(chǎn)品。
微量外泌體分離試劑盒(磁珠法)

貨號:
P-CA-501
試劑盒組分:
Exosome Beads,、
Solution A,、
Elution Buffer
原理概述
利用自主研發(fā)的均相液體磁珠(Exosome Beads),通過磁珠特異性結(jié)合外泌體而不吸附雜質(zhì),,以及磁性分離技術(shù),,達(dá)到高純度和高回收率的分離效果。
操作流程
1
樣品預(yù)處理:差速離心(300 g,,5 min→2000 g,,10 min→14000 g,30 min)逐步去除樣品中細(xì)胞,、細(xì)胞碎片及大體積顆粒,;
2
富集外泌體:向去除了保護(hù)液的磁珠中加入預(yù)處理后的樣品,置于搖床室溫旋轉(zhuǎn)孵育30 min,;
3
洗滌:置于磁力架上,,靜置30s,棄上清,,并用Solution A洗滌,,重復(fù)2次,保留磁珠,;
4
分離外泌體:加入Elution Buffer后置于搖床室溫旋轉(zhuǎn)孵育30 min,;置于磁力架上,靜置30s,,轉(zhuǎn)移上清到新的離心管中,,該上清即為分離的外泌體,。
注意事項
在某些樣品中,磁珠結(jié)合外泌體時可能會結(jié)團(tuán),,但不影響分離效果,,無需處理;
完成分離后的外泌體不宜長時間在Elution Buffer中保存,。若長時間保存,,可使用超濾管將溶液置換為PBS,。
優(yōu)勢
分離的外泌體純度高且完整性好,,適合分離微量或珍貴樣品中外泌體;分離操作簡便,,僅需常規(guī)磁力架,,無需特殊設(shè)備,,高通量,能同時處理多個樣本,,兼容自動化操作,。
通用外泌體分離試劑盒(SEC法)

貨號:
P-CA-502/P-CA-503
試劑盒組分:
Exosome Purification Column,、
Column Adapter
注:P-CA-502和P-CA-503僅產(chǎn)品規(guī)格和樣品上樣量有區(qū)別,其他操作是一致的,。
原理概述
基于分子排阻色譜原理,,利用外泌體純化柱(Exosome Purification Column)中的多孔凝膠顆粒作為填料,這些填料顆粒根據(jù)顆粒大小形成不同的孔道,,使得在PBS緩沖液流動的過程中,,將樣品中外泌體與其他不同尺寸的顆粒進(jìn)行分離。
操作流程
1
樣品預(yù)處理:差速離心(300 g,,5 min→2000 g,,10 min→14000 g,30 min)逐步去除樣品中細(xì)胞,、細(xì)胞碎片及大體積顆粒,;
2
純化柱預(yù)處理:將純化柱在室溫平衡30 min,檢查并排除空氣,,PBS平衡純化柱,;
3
外泌體分離:待樣品完-全進(jìn)入純化柱,,分批加入0.5 mL PBS,并收集流穿液,,其中4-8號管(P-CA-502)或8-12號管(P-CA-503)中收集的流穿液即為分離的外泌體;
4
純化柱維護(hù):先后加入PBS和20%乙醇清洗純化柱,,再將純化柱加滿20%乙醇密封,,于4℃保存。
注意事項
本操作中使用的PBS和20%乙醇建議現(xiàn)配現(xiàn)用,,同時經(jīng)0.2 μm濾膜過濾,、超聲或真空脫氣,避免造成純化柱出現(xiàn)大量氣泡,,影響分離效果,;
純化柱使用前需充分平衡至室溫(18-25℃),溫度過低或過高,,都會影響外泌體分離效果,;
純化柱中間不能有氣泡,使用前后需認(rèn)真檢查,,避免影響外泌體分離效果,;
純化柱可以反復(fù)利用,但多次使用會影響純化效果,,建議重復(fù)使用不超過5次,;
當(dāng)分離的外泌體進(jìn)行NGS或者其他組學(xué)分析時,為避免交叉污染,,建議每個樣品使用一支新的純化柱,。
優(yōu)勢
分離的外泌體純度高、回收率高,;操作簡單,,無需專業(yè)的純化設(shè)備,可獲得無蛋白污染,、用于鑒定檢測和功能研究的高質(zhì)量外泌體,。
離心柱式外泌體分離試劑盒

貨號:
P-CA-504
試劑盒組分:
Spin Column 01、
Collection Tubes (2 mL),、
Solution A
原理概述
離心柱中裝填的介質(zhì)能無差別吸附雜質(zhì)而不結(jié)合外泌體,,利用離心力實現(xiàn)樣品中外泌體與雜質(zhì)的分離。此法不僅可快速分離外泌體,,還可去除游離的外泌體標(biāo)記染料,。
操作流程
1
樣品預(yù)處理:差速離心(300 g,5 min→2000 g,,10 min→14000 g,,30 min)逐步去除樣品中細(xì)胞,、細(xì)胞碎片及大體積顆粒;
2
離心柱預(yù)處理:棄去離心柱(Spin Column 01)上層的保護(hù)液體,,加入Solution A離心洗滌,;
3
外泌體分離:將預(yù)處理后的樣品加入離心柱中,離心獲得的洗脫液即為分離的外泌體,。
注意事項
單個離心柱最大上樣體積為500 μL,,若樣品體積超過500 μL,則建議試用50 kDa超濾管濃縮樣品至0.5 mL,,注意濃縮體積不超過20倍,;
對高粘度樣品,如血漿,、血清,、胸腹水等樣本,可用等體積去離子水稀釋再加入到離心柱中,;
對雜質(zhì)較多的樣品,,如血漿、血清,、胸腹水,、牛奶等樣本,建議用PBS稀釋10倍后,,經(jīng)過50 kDa超濾管濃縮10倍,;然后加入剩余液體10倍體積的PBS,超濾濃縮10倍后,,再用離心柱分離外泌體,;
離心法分離時,控制離心力在300-500×g,;若樣品粘度大,,可適當(dāng)增加離心力,以確保分離效果,。
優(yōu)勢
外泌體分離操作簡便,、高純度和高富集量,無需磁力架,、超速離心機(jī)等特殊設(shè)備,;能去除游離的外泌體標(biāo)記染料。
外泌體分離試劑盒(沉淀法)

貨號:
P-CA-505
試劑盒組分:
Exosome Precipitation Solution,、
Solution A
原理概述
通過添加特定的試劑(如Exosome Precipitation Solution),,使樣品中的外泌體迅速聚集沉降,再通過離心收集沉淀中的外泌體。
操作流程
1
樣品預(yù)處理:差速離心(300 g,,5 min→2000 g,,10 min→14000 g,30 min)逐步去除樣品中細(xì)胞,、細(xì)胞碎片及大體積顆粒,;
2
沉淀外泌體:血清/血漿樣品按照樣品:Solution A:Exosome Precipitation Solution=2:2:1的體積比混勻;細(xì)胞培養(yǎng)上清/尿液樣品按照樣品:Exosome Precipitation Solution=4:1的體積比混勻,;室溫孵育30 min或4℃孵育過夜,;
3
外泌體回收:高速離心,吸棄上清,,向沉淀中加入Solution A重懸沉淀,再次離心收集上清,,即為分離的外泌體,。
注意事項
注意樣品與各試劑的體積比,嚴(yán)格按照推薦比例操作,;
細(xì)胞培養(yǎng)上清或尿液樣品體積過大,,可以先進(jìn)行濃縮再進(jìn)行沉淀;
操作要輕柔,,吸棄上清時避免吸到沉淀影響外泌體得率,;
實驗時間允許情況下,為保證外泌體分離的高回收率,,推薦4℃孵育過夜,。
優(yōu)勢
適用樣品廣,外泌體回收率高,、重復(fù)性好,;無需特殊設(shè)備,操作簡便快速,,能同時處理多個樣本,。
希望這篇關(guān)于外泌體分離試劑盒的選用指南能幫助到您,!更多細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)干貨,請持續(xù)關(guān)注細(xì)胞學(xué)堂專欄~

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