SAINT 試劑的儲(chǔ)存
我們所有的 SAINT 試劑均作為即用型轉(zhuǎn)染試劑在室溫下運(yùn)輸,。到達(dá)后,,應(yīng)儲(chǔ)存在 4-7°C 下(不要冷凍),。穩(wěn)定性研究表明,,SAINT 試劑在開封后至少可穩(wěn)定一年,。
我將 SAINT 試劑存放在冰箱中,。我還能使用它嗎?
是的!解凍后,,SAINT 試劑可能會(huì)出現(xiàn)渾濁和更粘稠,。使用前,請確保渦旋充分以獲得均勻的分散,,或者更好的是,,聲音達(dá)到透明度?;旌衔锊?/span>*全再溶解會(huì)導(dǎo)致工作濃度降低,。
我可以在有血清的情況下使用 SAINT 嗎?
是的!在血清存在的情況下,,SAINT 轉(zhuǎn)染不會(huì)受到抑制,。然而,由于 siRNA 極易被血清中存在的 RNA 酶降解,,因此可以使用使用 SAINT-sRNA 的替代無血清 siRNA 轉(zhuǎn)染方案,。
抗生素會(huì)干擾我的轉(zhuǎn)染嗎?
不!抗生素對(duì)轉(zhuǎn)染效率沒有影響,。
哪些參數(shù)會(huì)影響轉(zhuǎn)染結(jié)果?
通常,,以下參數(shù)會(huì)影響轉(zhuǎn)染結(jié)果:
DNA、RNA,、寡核苷酸或蛋白質(zhì)的純度和濃度
載體序列(啟動(dòng)子,、poly(A)-tail、密碼子使用等)
添加的 SAINT/DNA 復(fù)合物量
靶細(xì)胞(細(xì)胞類型,、細(xì)胞周期,、傳代數(shù)等)
蛋白質(zhì)表達(dá)(時(shí)間依賴性表達(dá)水平、表達(dá)蛋白質(zhì)的毒性等)
與大多數(shù)其他轉(zhuǎn)染試劑和遞送系統(tǒng)一樣,,使用高度純化的 DNA,、RNA 或蛋白質(zhì)/肽可獲得最佳結(jié)果。
細(xì)胞的“轉(zhuǎn)染性”變化很大,。例如,,非分裂和非貼壁細(xì)胞通常難以轉(zhuǎn)染,而其他細(xì)胞類型可能很容易轉(zhuǎn)染,,轉(zhuǎn)染效率在 80% 到 100% 之間,。此外,某些轉(zhuǎn)染試劑可能比其他試劑對(duì)某些細(xì)胞效果更好,而某些試劑可能對(duì)特定細(xì)胞類型有毒,。因此,,我們建議花一些時(shí)間使用報(bào)告基因構(gòu)建體(如 GFP)優(yōu)化特定細(xì)胞類型的轉(zhuǎn)染條件。
為什么我使用雙倍量的 SAINT 時(shí),,我的轉(zhuǎn)染效率沒有翻倍?
SAINT-DNA/sRNA/mRNA 中的陽離子組分與帶負(fù)電荷的 DNA/siRNA/mRNA 之間的電荷比對(duì)于高效轉(zhuǎn)染非常重要,。作為起點(diǎn),我們建議使用 1:20 比例的 DNA/RNA:SAINT 試劑 (w:v)(例如,,對(duì)于 12 孔規(guī)格,,0.5 ug DNA:10 ul SAINT-DNA)。為了在您的實(shí)驗(yàn)中獲得最佳轉(zhuǎn)染結(jié)果,,值得優(yōu)化 DNA/RNA 劑量(例如,,對(duì)于 12 孔規(guī)格,0.25 ug – 1 ug DNA)和 DNA/RNA:SAINT 試劑比例(例如,,對(duì)于 12 孔規(guī)格,,1:10 – 1:40)。
我應(yīng)該使用哪種 SAINT 試劑進(jìn)行 DNA,、RNA 和/或蛋白質(zhì)的共轉(zhuǎn)染?
我們的 SAINT 試劑針對(duì) DNA (SAINT-DNA),、siRNA (SAINT-sRNA)、mRNA (SAINT-mRNA) 和蛋白質(zhì) (SAINT-protein) 的轉(zhuǎn)染進(jìn)行了優(yōu)化,,但它們都可以在一定程度上遞送其他分子,。根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)要求,您可以將一種 SAINT 試劑用于兩個(gè)不同的分子,,或者每個(gè)分子使用特定的 SAINT 試劑,。
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