一,、實驗原理 

蛋白提取試劑盒通過溫和裂解細胞或組織釋放總蛋白,，并利用特異性結(jié)合,、離心分離及緩沖液洗脫等技術去除雜質(zhì)（如核酸,、脂類等），最終獲得高純度,、高活性的目標蛋白,。  

核心步驟：  

1、裂解：裂解液（含去污劑,、蛋白酶抑制劑等）破壞細胞膜結(jié)構,，釋放胞內(nèi)蛋白,；

2、離心去除碎片：高速離心去除未裂解的細胞碎片,、細胞核及大分子雜質(zhì),；

3、蛋白純化：通過離心柱或特異性結(jié)合樹脂選擇性吸附蛋白,，雜質(zhì)隨廢液排出,；

4、洗脫：低鹽緩沖液或去離子水洗脫目標蛋白,，避免變性,。

二、材料準備  

試劑盒：蛋白提取試劑盒 （適用于各種動物,、植物細胞和組織細菌樣本） 

自備材料：  

- 新鮮樣本（細胞,、組織等）  

- 預冷 PBS 緩沖液 （貨號：abs962） 

- 離心機（可達到12,000xg）  

- 冰盒或低溫操作臺  

- 渦旋振蕩器 （貨號：abs72001）  

- BCA 蛋白定量試劑盒  （貨號：abs9232）

- 液氮（組織樣本需速凍）  

三、實驗步驟 （裂解蛋白所有步驟都需在冰上或4℃進行）

1,、樣本處理

- 細胞樣本：離心收集細胞（1500xg, 3min）,，PBS 洗滌 2 次，吸盡殘留液體,。  

- 組織樣本：切取 10–50 mg,，液氮速凍后研磨成粉末。  

2,、裂解 （具體步驟參考不同提取試劑盒說明書）

- 加入 200-500μL 預冷裂解液（含蛋白酶抑制劑）,，渦旋混勻。  

- 冰上裂解 20-30 分鐘,，每隔 5 分鐘渦旋 10 秒,。  

3、離心去碎片  

- 12,000xg,、4℃ 離心 10 分鐘,，取上清（即為總蛋白）轉(zhuǎn)移至新離心管。

-核蛋白需先分離細胞核：低滲裂解后離心收集核沉淀,，再溶解,。  

4、蛋白純化

（注：下游做質(zhì)譜或酶活性分析需要4,、5步）

- 將離心柱用平衡緩沖液預處理 5 分鐘,，離心棄廢液。  

- 將裂解液上清加入離心柱,，12,000 xg 離心 1 分鐘，棄廢液,。  

- 加入洗滌緩沖液 500 μL,，離心 1 分鐘,，重復 2 次。  

5,、洗脫蛋白    

- 加入 50–100 μL 洗脫緩沖液,，靜置 2 分鐘后離心 1 分鐘，收集洗脫液（即目標蛋白）,。

6,、蛋白保存

- 將提取的蛋白樣品分裝到小離心管中，可根據(jù)實驗需求短期保存在 - 20°C 或長期保存在 - 80°C 冰箱中,，避免反復凍融,。

四、結(jié)果分析

1,、濃度測定：  

   - 使用 BCA 法測定蛋白濃度,，OD562 計算濃度（標準曲線法）。 

2,、純度評估：  

   - 分光光度計檢測 A???/A??? 比值（理想值 1.8–2.0,，若 >2.0 提示核酸殘留）。 

3,、電泳驗證：  

   - SDS-PAGE 電泳檢測條帶清晰度,，無拖尾或雜帶表明純度較高。

五,、常見問題及解決方案

六,、注意事項

1,、全程低溫操作（冰上或4℃環(huán)境），防止蛋白降解,；

2,、裂解液需現(xiàn)用現(xiàn)配，避免反復凍融,；

3,、組織樣本需充分勻漿，避免未裂解細胞殘留,。

通過本方案,，可高效提取高純度蛋白，適用于 Western Blot,、ELISA,、質(zhì)譜分析等下游實驗,。

Absin蛋白提取試劑盒相關產(chǎn)品

Absin產(chǎn)品線：

爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC,、IHC、凋亡,、ELISA,、ChIP、Co-IP,、TR-FRET,、生化檢測、殘留檢測,、多因子檢測),；細胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細胞因子),、分化試劑盒,；分子(mRNA合成服務+提取試劑盒)；化合物大包裝,；輔助試劑,、耗材/儀器、定制服務(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...

特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE,、B27,、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE,、百日咳毒素PTX,、重組人胰島素Insulin,、人源低密度脂蛋白LDL...