細(xì)胞污染的種類可分成細(xì)菌、酵母菌、霉菌,、病毒和霉?jié){菌,。主要的污染原因?yàn)闊o(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng),、操作室環(huán)境不佳,、污染之血清和污染之細(xì)胞等,。嚴(yán)格之無(wú)菌操作技術(shù),、清潔的環(huán)境,、與品質(zhì)良好之細(xì)胞來(lái)源和培養(yǎng)基配制是減低污染之好方法。細(xì)胞受到嚴(yán)重污染時(shí),，有時(shí)即使想盡各種辦法也難以挽回,。因此，防止污染,，預(yù)防是關(guān)鍵,。只有將預(yù)防措施貫穿于整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)的始終，才能將發(fā)生污染的可能性降到最小程度,。

一,、一般預(yù)防細(xì)胞污染以下幾方面：

1、從物品,、用品消毒滅菌著手

細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清洗,、消毒要徹di，各種溶液滅菌除菌要仔細(xì),，并在取樣檢菌一周后確認(rèn)無(wú)菌才能使用,。同時(shí)，在無(wú)菌過(guò)濾操作中,，隨著濾過(guò)體積的增大,，濾膜破損的可能性增加，故應(yīng)選擇最后過(guò)濾的液體進(jìn)行檢測(cè),。定期對(duì)二氧化碳培養(yǎng)箱進(jìn)行消毒,。具體操作：75%的酒精搽拭培養(yǎng)箱后，使用可移動(dòng)的紫外燈至少消毒 30min,，加入高壓滅菌過(guò)的超純水于培養(yǎng)箱水槽中保持濕度,。也可配制300ml的飽和硫酸銅加3L滅菌超純水混合成硫酸銅溶液加入水槽中。

2,、添加抗生素

各種抗生素性質(zhì)不同,，對(duì)各種微生物的作用也不同，聯(lián)合應(yīng)用比單用效果好，預(yù)防性應(yīng)用比污染后使用好,。但反復(fù)使用抗生素會(huì)使微生物產(chǎn)生耐藥性,，且對(duì)細(xì)胞本身也有一定影響，因此為避免誘導(dǎo)抗藥細(xì)菌,，應(yīng)定期更換培養(yǎng)系統(tǒng)中的抗生素,，或盡可能不用抗生素處理。

3,、從操作者做起

（1）進(jìn)無(wú)菌室前要徹di洗手,，按規(guī)定穿隔離衣。開(kāi)始操作前要用75%酒精棉球擦手,、擦瓶口和燒灼瓶口,。

（2）操作者動(dòng)作要輕，安裝吸管帽,、打開(kāi)或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過(guò)燒灼進(jìn)行,。但要注意，金屬器械不能在火焰中長(zhǎng)時(shí)間燒灼,，以防退火,；燒過(guò)的器械要冷卻后才能使用；已吸過(guò)培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼,，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì),，吸管再用時(shí)會(huì)將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞,、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過(guò)火焰是也不能時(shí)間太長(zhǎng),，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞,，同時(shí)塑料細(xì)胞培養(yǎng)用品也會(huì)產(chǎn)生變形影響使用,。

（3）操作時(shí)盡量不要談話，咳嗽以防止來(lái)自唾沫和呼出的氣流所造成的污染,。

（4）使用培養(yǎng)液前不宜過(guò)早開(kāi)瓶,，開(kāi)瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立,，以防止下落細(xì)菌的污染,。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前勿過(guò)早暴露在空氣中,。

（5）操作完畢后應(yīng)整理好工作臺(tái)面,，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺(tái)面。

（6） 吸取培養(yǎng)液,、細(xì)胞懸液時(shí),，應(yīng)專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴(kuò)大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染,。

4、防止細(xì)胞交叉污染

所有從別處轉(zhuǎn)來(lái)的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲(chǔ)備,，一旦懷疑發(fā)生交叉污染,，可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變,，可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用,。重要細(xì)胞系（株）的傳代工作應(yīng)由兩人獨(dú)立進(jìn)行。

5,、無(wú)菌室的徹di消毒

（1） 新潔爾滅全面徹di擦洗無(wú)菌室,。使用前應(yīng)稀釋即配即用。新潔爾滅和酒精相比,，最大的優(yōu)點(diǎn)是便宜,，因?yàn)樾聺崰枩?00ml只需5元，而且可以稀釋50倍用,，而同樣量的酒精價(jià)格可能是新潔爾滅的幾十倍,。

（2）甲醛熏蒸法：甲醛是一種廣譜滅菌劑菌，其水溶液和氣體對(duì)各種細(xì)菌,、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用,。甲醛價(jià)廉，熏蒸消毒時(shí)不損壞衣服,、家具,、皮革、橡膠等,。市售的甲醛水溶液中一般含37-40%的甲醛,。

二、預(yù)防細(xì)胞污染主要用法：

1,、熏蒸消毒：每立方米空間甲醛用量為10~15毫升,，熏蒸消毒時(shí)應(yīng)密閉門窗封閉至少4h以上。高錳酸鉀加40%甲醛（1:1）混合后放入一開(kāi)發(fā)容器中,，立即可見(jiàn)白色甲醛煙霧,。消毒后可放入25%氨水蒸發(fā)中和刺激氣味。氨水用量為所用甲醛水溶液的一半,，時(shí)間為30分鐘,。甲醛氣體毒性非常強(qiáng)，所以操作時(shí)一定需帶上防毒面具,。

2,、自然揮發(fā)： 將較大量的甲醛水溶液放入一敞開(kāi)容器中，室內(nèi)溫度保持在18攝氏度以上，同時(shí)室內(nèi)噴水以保持相對(duì)濕度在70%以上,，經(jīng)16小時(shí)可達(dá)到室內(nèi)消毒的目的,。

三、細(xì)胞發(fā)生污染處理方法：

首先,，確定污染物是細(xì)菌,、真菌、支原體或酵母,，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開(kāi),，用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái)，檢查HEPA過(guò)濾器,。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對(duì)一些細(xì)胞系有毒性,，因而，做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平,。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂(lè)菌素時(shí)尤其重要,。

下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟：

1、在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中消化,、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞,，稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。

2,、分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,，或幾個(gè)小培養(yǎng)瓶中。在一個(gè)濃度梯度范圍內(nèi),，把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中,。例如，兩性霉素B推薦下 列濃度,，0.25,，0.50，1.0,，2.0,，4.0,8.0 mg/ml。

3,、每天觀測(cè)細(xì)胞毒性指標(biāo),，如脫落，出現(xiàn)空泡,，匯合度下降和變圓,。

4、確定抗生素毒性水平后,，使用低于毒性濃度2～3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2～3代,。

5,、在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代。

6,、重復(fù)步驟4,。

7、在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4～6代,，確定污染是否以已被消除,。