蛋白Marker主要分為未預(yù)染蛋白Marker和預(yù)染蛋白Marker兩種,,另外還有一些其他類型的蛋白Marker:如顯影蛋白Marker等,。
未預(yù)染蛋白Marker:
是幾種已知分子量并純化好的蛋白質(zhì)預(yù)混液,。
非預(yù)染蛋白Marker在電泳過程中看不到,,電泳結(jié)束后經(jīng)過蛋白染色后才能起指示作用,,無法在實驗過程中起預(yù)示作用,。
但是由于蛋白沒有附帶染料分子或者是標記分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,,所以最準確,。
預(yù)染蛋白Marker:
是純化好的幾種蛋白,通過與染料共價耦聯(lián)后混合在一起,,在電泳過程中或者轉(zhuǎn)膜時可以直接觀察到的一種蛋白Marker,。
預(yù)染蛋白Marker又可分為單色預(yù)染和多色預(yù)染,。
Marker條帶越多參考價值越大,同時也越難區(qū)分,,若用不同顏色則容易辨認,;
單色的Marker通常利用其中某些條帶加倍濃度來提示其大小。
預(yù)染蛋白Marker在電泳過程可以起到預(yù)示作用,,當觀察目標蛋白大小位置進入最佳分辨區(qū)時,,停止電泳,以得到最佳分辨效果,。
轉(zhuǎn)膜過程可以監(jiān)測轉(zhuǎn)膜效率,,同時可以在膜上標記蛋白分子量。
但是,,預(yù)染蛋白Marker與染料共價偶聯(lián),,在不同的緩沖條件下,電泳遷移特性可能會發(fā)生某些變化,,導(dǎo)致一些偏差,。
也就是說,預(yù)染蛋白Marker條帶代表的是相對大小,,而不是絕對大小,。
顯影蛋白Marker:
顯影蛋白Marker,蛋白條帶中含有IgG結(jié)合位點,,IgG結(jié)合位點會結(jié)合用于檢測靶蛋白的一抗或二抗,,使得蛋白Marker在印跡膜上可與目的條帶一同呈現(xiàn)。
通常會有兩個預(yù)染條帶,,便于動態(tài)觀察蛋白質(zhì)電泳狀態(tài),,判斷轉(zhuǎn)膜效果和方向;
結(jié)合抗體后經(jīng)化學(xué)發(fā)光檢測可顯示多個條帶,。
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