什么是胎牛血清,？

    采自5-8個(gè)月胎齡牛胚胎中的胎血,。此時(shí)胎牛各臟器正處生長(zhǎng)分化階段，血中含有豐富的生長(zhǎng)發(fā)育因子,，非常適合各種細(xì)胞的培養(yǎng),。一旦胚胎發(fā)育wan全，這些因子自動(dòng)消失,。因此,，8個(gè)月胎齡以上的牛胚胎，已接近足月,，不能作為胎牛血清的原料來使用,。

WinSera胎牛血清的使用要點(diǎn)

1.初次開封胎牛血清如何化凍？

胎牛血清常規(guī)儲(chǔ)存溫度為-20℃,，如果更加長(zhǎng)期保存可以-80℃保存,。解凍的時(shí)候不建議直接放在常溫中（25-37℃）解凍，很容易產(chǎn)生絮狀沉淀,，進(jìn)而有可能影響血清品質(zhì),。建議的方式為先由-20/-80℃轉(zhuǎn)移到4℃解凍，全部為液體后，再由4℃轉(zhuǎn)移到室溫,。在解凍的過程中,，需要隨時(shí)晃動(dòng)，使血清內(nèi)成分和溫度混合均勻,，有助于減少沉淀的產(chǎn)生,。解凍后，就可以把血清用15 mL或者50 mL無菌離心管分裝凍存啦,，可以根據(jù)自己使用血清的頻率在4℃存放一管已化凍分裝的血清,，方便經(jīng)常配制培養(yǎng)基，在4℃也不可以存放太久,，最好在一個(gè)月內(nèi)用完,。解凍后的胎牛血清不可以在37℃或者室溫存放太久，避免血清中重要的細(xì)胞生長(zhǎng)因子失活而影響細(xì)胞狀態(tài),。

2.血清的用量
原則上血清添加量不宜太多,，通常添加5%、10%,、20%,。大部分細(xì)胞正常培養(yǎng)使用10%的血清濃度，部分細(xì)胞原代提取時(shí)使用20%血清,。具體某一株細(xì)胞適應(yīng)的血清濃度,，需要根據(jù)細(xì)胞特性、實(shí)驗(yàn)?zāi)康拿鳌?/span>

3.胎牛血清什么時(shí)候需要熱滅活,？
這就涉及到什么是熱滅活,。熱滅活一般是以56℃，30 min來處理已解凍的血清,，因?yàn)榇思訜岵襟E,，可以使補(bǔ)體去活化，而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有：溶細(xì)胞活性,，平滑肌的收縮,，肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放，增強(qiáng)吞噬作用,，淋巴細(xì)胞,、巨噬細(xì)胞的趨化和激活。除了這些特殊實(shí)驗(yàn)要求,，常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)需要熱滅活嗎,？通常來說，熱滅活對(duì)大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)都不是必須進(jìn)行的步驟,，經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)作用很小,，甚至可能會(huì)因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低，沉淀物增多等不好的影響,。

4.更換血清的正確步驟,。
養(yǎng)細(xì)胞的小伙伴經(jīng)常會(huì)遇到同一個(gè)細(xì)胞需要更換血清的情況。如果將另一款血清配制的培養(yǎng)基直接用于細(xì)胞培養(yǎng),，可能會(huì)發(fā)現(xiàn)以前增殖很快的細(xì)胞突然變慢甚至逐漸脫壁死亡了,。這種情況下，多數(shù)為細(xì)胞被以往的培養(yǎng)環(huán)境馴化,，突然更換一個(gè)新的營養(yǎng)環(huán)境,，哪怕是品質(zhì)更好的血清，也可能會(huì)出現(xiàn)不適應(yīng)的情況,。通常來說,，更換血清的時(shí)候我們會(huì)遵循梯度更換保證細(xì)胞可以適應(yīng)。血清開始使用時(shí),，如果是重新復(fù)蘇細(xì)胞,，建議用原培養(yǎng)體系進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇，待細(xì)胞狀態(tài)恢復(fù)后再進(jìn)行測(cè)試,。測(cè)試時(shí)不建議直接100%換成新血清體系進(jìn)行培養(yǎng)，應(yīng)按照比例梯度替換,。例如,，換液按照新舊體系1:3，第二次換液1:1,，第三次換液3:1,，而后全替換。針對(duì)一些對(duì)培養(yǎng)體系較為敏感的細(xì)胞,，需進(jìn)一步細(xì)化替換比例,。

5.血清解凍以后出現(xiàn)了懸浮物是什么？還能繼續(xù)用嗎,？

解凍以后如果發(fā)現(xiàn)有少量乳白色的絮狀或者點(diǎn)狀物質(zhì),，這種主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成，這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量,，可用400×g離心5 min取上清,。不會(huì)對(duì)細(xì)胞有太大的影響。

解凍后出現(xiàn)的絮狀沉淀

6.血清在使用前是否需要對(duì)血清進(jìn)行過濾,？
一般廠商提供的血清為無菌,，無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,，則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,，切勿直接過濾血清,。

7.使用血清培養(yǎng)細(xì)胞以后，鏡下觀察到會(huì)動(dòng)的“小黑點(diǎn)”會(huì)是污染嗎,？

如果您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成,，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,，黑點(diǎn)是否做不規(guī)則游動(dòng),。如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖,，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃,、變混濁。污染包括細(xì)菌污染,、支原體污染等,。

如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長(zhǎng)狀態(tài)良好,，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比,，沒有任何變化，那么,，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：

(1)細(xì)胞生長(zhǎng)過程中自然破碎后的細(xì)胞殘?。?/span>

(2)血清中的雜蛋白,，可能是反復(fù)凍融的結(jié)果,；

(3)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格,?？蓱?yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點(diǎn),；

(4)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn),，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除,。

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