厭氧培養(yǎng)箱菌種置入操作流程及培養(yǎng)方法
厭氧培養(yǎng)箱菌種置入操作流程及培養(yǎng)方法
?一、菌種置入操作流程?
?準(zhǔn)備工作?
檢查取樣室內(nèi)門是否關(guān)緊,,確保操作室與外界隔絕?,。
清潔取樣室及操作手套,避免污染,;確認(rèn)鈀催化劑和干燥劑活性(若失效需更換或再生)?,。
?菌種傳遞?
打開取樣室外門,將菌種放入取樣室后立即關(guān)閉外門?,。
?氣體置換流程?:
?抽真空?:啟動(dòng)真空泵,,抽真空至壓力≥66kPa(500mmHg),停止后關(guān)閉真空閥?,。
?充氮?dú)?:打開氮?dú)忾y向取樣室充入氮?dú)庵翂毫謴?fù)常壓,,重復(fù)抽真空-充氮?dú)獠僮?次,置換殘留氧氣?,。
?混合氣體補(bǔ)充?:最后一次充氣時(shí)改用混合氣體(N? 85%,、H? 10%、CO? 5%),,流量控制在10ml/min?,。
?環(huán)境驗(yàn)證?
使用美蘭指示劑檢測氧濃度:若指示劑保持無色,,表明操作室內(nèi)氧濃度≤1ppm,,達(dá)到厭氧標(biāo)準(zhǔn)?。
?二,、培養(yǎng)方法及環(huán)境維持?
?參數(shù)設(shè)置?
設(shè)置恒溫培養(yǎng)溫度(常規(guī)35–37℃),,控溫精度需達(dá)±0.3℃?。
啟動(dòng)鈀催化劑和除氧裝置,,持續(xù)吸附微量氧氣并維持濕度<10%?,。
?培養(yǎng)操作?
通過手套操作孔進(jìn)行菌種接種,,避免手套破損導(dǎo)致氧氣滲入?。
將接種后的培養(yǎng)基平皿或試管置于操作室內(nèi)的恒溫區(qū)域,,確保風(fēng)道暢通以保持溫度均勻?,。
?長期培養(yǎng)維護(hù)?
?氣體補(bǔ)充?:每日向操作室持續(xù)通入微量混合氣體(10ml/min),通過鈀催化反應(yīng)消耗殘留氧氣?,。
?環(huán)境監(jiān)測?:每日檢查美蘭指示劑顏色變化,,若變藍(lán)需重新置換氣體?。
?耗材更換?:每周再生鈀催化劑(160℃烘烤2小時(shí)),,每1–2年更換一次,;干燥劑和活性炭每1–2周更換?。
?三,、關(guān)鍵注意事項(xiàng)?
?安全操作?
混合氣體含氫氣,,操作時(shí)遠(yuǎn)離火源并確保設(shè)備接地良好?。
傳遞菌種時(shí)嚴(yán)格遵循“抽真空-充氮?dú)狻绷鞒?,避免氧氣殘?,。
?設(shè)備維護(hù)?
定期校準(zhǔn)溫度傳感器和氧濃度檢測儀,防止數(shù)據(jù)偏差?13,。
停止使用時(shí),,運(yùn)行40℃以上烘干程序2小時(shí)并開門通風(fēng),防止箱內(nèi)冷凝水積聚?,。
?異常處理?
若氧濃度異常升高,,立即暫停實(shí)驗(yàn),排查氣路泄漏或催化劑失效問題
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