BCA（Bicinchoninic Acid）法是一種常用的蛋白定量檢測方法,，其原理是利用蛋白質(zhì)與銅離子在堿性溶液中發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，生成穩(wěn)定的紫紅色復(fù)合物,，再與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較,，即可求出待測蛋白的濃度,。該方法具有靈敏度高、準(zhǔn)確度高,、操作簡便,、抗干擾能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)等領(lǐng)域,。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1.試劑準(zhǔn)備

（1）BCA工作液：將BCA試劑A和B按50:1的比例混合,，充分搖勻，備用,。

（2）標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液：取適量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白,，用PBS或去離子水溶解,，配制成濃度為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液。

2.蛋白樣品制備

（1）細(xì)胞裂解：將細(xì)胞樣品離心,，去除上清液,，加入適量的細(xì)胞裂解液，在冰上裂解30min,，使細(xì)胞充分裂解,。

（2）去除雜質(zhì)：將裂解后的樣品離心，去除沉淀,，保留上清液,。在上清液中加入適量的SDS，使終濃度為0.1%,，充分混勻,。

（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：取適量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液，加入適量的SDS,，使終濃度為0.1%,，然后分別稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液。取96孔板,，分別加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液，每個濃度設(shè)3個復(fù)孔,。在每個孔中加入BCA工作液,，充分混勻。然后按照說明書要求,，在特定波長下測量吸光度值,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.蛋白定量檢測

（1）取適量的待測蛋白樣品,，加入適量的SDS,，使終濃度為0.1%，充分混勻,。然后按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法,，加入BCA工作液，測量吸光度值,。

（2）根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,，查找出待測蛋白樣品的濃度。如果待測蛋白樣品濃度較高,，可以進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定,。

注意事項：

1.BCA工作液應(yīng)儲存于4℃避光保存，避免反復(fù)凍融,。

2.實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)保持樣品和標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液的pH值一致,，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性,。

3.在實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)避免交叉污染，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。

4.對于一些特殊的蛋白質(zhì)樣品,，可能需要采用其他方法進(jìn)行定量檢測。