原代細(xì)胞的生存受多種因素影響,，以下是一些關(guān)鍵要點：

合適的培養(yǎng)環(huán)境

培養(yǎng)基：是為原代細(xì)胞提供營養(yǎng)和維持生存的基礎(chǔ)。不同類型的原代細(xì)胞對培養(yǎng)基的需求差異很大，如神經(jīng)細(xì)胞通常需要含有特殊生長因子和營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基,，以支持其生長和分化,；而皮膚成纖維細(xì)胞則可以在較為通用的 DMEM 培養(yǎng)基中良好生長,。

溫度：一般來說,，來源于人體和哺乳動物的原代細(xì)胞最適培養(yǎng)溫度為 37℃,，這與體內(nèi)環(huán)境溫度一致。溫度過高或過低都會影響細(xì)胞的代謝活動和生理功能,，甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡,。

氣體環(huán)境：主要是氧氣和二氧化碳。氧氣是細(xì)胞進(jìn)行有氧呼吸,、產(chǎn)生能量的必要條件,；二氧化碳對于維持培養(yǎng)基的 pH 值穩(wěn)定至關(guān)重要。通常細(xì)胞培養(yǎng)需要在含 5% 二氧化碳的培養(yǎng)箱中進(jìn)行,，以保證培養(yǎng)基的 pH 值維持在 7.2-7.4 之間,。

濕度：培養(yǎng)環(huán)境的濕度應(yīng)保持在 95% 左右，以防止培養(yǎng)基中的水分蒸發(fā),，維持培養(yǎng)基的成分穩(wěn)定和滲透壓平衡。

細(xì)胞接種密度

原代細(xì)胞接種密度過低,，細(xì)胞之間的相互作用減少,，可能會影響細(xì)胞的增殖和存活；接種密度過高,，細(xì)胞會過早地接觸抑制,，營養(yǎng)物質(zhì)消耗過快，代謝廢物積累過多,，也不利于細(xì)胞的長期生存,。如肝細(xì)胞原代培養(yǎng)時，合適的接種密度可能在每平方厘米 1×10? - 5×10?個細(xì)胞,。

底物和支架

許多原代細(xì)胞具有貼壁生長的特性,，需要合適的底物來附著和鋪展。細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿表面通常經(jīng)過特殊處理,，以增加細(xì)胞的貼壁能力,。對于一些特殊細(xì)胞，還需要使用細(xì)胞外基質(zhì)成分如膠原蛋白,、纖連蛋白等進(jìn)行包被,，為細(xì)胞提供更接近體內(nèi)的微環(huán)境，促進(jìn)細(xì)胞的附著和生長,。

避免污染

無菌操作：在原代細(xì)胞培養(yǎng)的整個過程中,，必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則。實驗人員要穿戴無菌工作服,、口罩,、手套等，實驗器材和培養(yǎng)基等都要經(jīng)過嚴(yán)格的滅菌處理,。

檢測和預(yù)防：定期對細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行微生物污染檢測,，包括細(xì)菌,、真菌、支原體等,。一旦發(fā)現(xiàn)污染,，應(yīng)立即采取措施，如丟棄受污染的細(xì)胞培養(yǎng)物,，對培養(yǎng)環(huán)境和器材進(jìn)行chedi消毒等,。

生長因子和激素

許多原代細(xì)胞的生長和生存依賴于特定的生長因子和激素。如表皮生長因子（EGF）可以促進(jìn)上皮細(xì)胞的增殖和分化,；胰島素樣生長因子（IGF）對多種細(xì)胞的生長和代謝具有調(diào)節(jié)作用,。在培養(yǎng)原代細(xì)胞時，需要根據(jù)細(xì)胞類型添加相應(yīng)的生長因子和激素,，以維持細(xì)胞的正常生理功能和生存,。

原代細(xì)胞的生存需要在各個環(huán)節(jié)精心把控，為細(xì)胞提供最適宜的條件,，才能保證細(xì)胞的正常生長和用于各種科學(xué)研究及應(yīng)用,。