E. coli RNase H（E. coli 核糖核酸酶 H）是一種能夠特異性降解RNA-DNA雜交鏈中RNA部分的酶,，在DNA復(fù)制、修復(fù)和轉(zhuǎn)錄等過程中發(fā)揮重要作用,。它通過切割RNA鏈,，確保DNA模板的完整性和穩(wěn)定性，因此在分子生物學(xué)實驗中被廣泛應(yīng)用,，例如cDNA合成,、rRNA去除和RNA干擾研究。然而,，RNase H 在使用過程中也存在一些缺陷：1）它可能對單鏈RNA或DNA產(chǎn)生非特異性切割,，影響實驗結(jié)果的準確性；2）其熱穩(wěn)定性較差,，難以在高溫條件下保持活性,，因此不適用于高溫逆轉(zhuǎn)錄、PCR等需要高溫環(huán)境的實驗,。這些局限性促使研究人員開發(fā)熱穩(wěn)定RNase H,，以拓展其應(yīng)用范圍并提高實驗效率。

圖1.RNase H作用機理

源自Thermus thermophilus的Thermostable RNase H（熱穩(wěn)定核糖核酸酶H）是E. coli RNase H的同源物,，在功能上表現(xiàn)出相似的核糖核酸內(nèi)切酶特性,。它能夠精準識別并高效切割 RNA:DNA雜交體中的RNA鏈磷酸二酯鍵，同時確保DNA鏈的完整性,。通過對蛋白結(jié)構(gòu)的深入分析發(fā)現(xiàn),，盡管T. thermophilus RNase H的整體穩(wěn)定性分布與E. coli RNase H具有一定相似性，但前者在整體穩(wěn)定性以及殘基局部穩(wěn)定性方面均表現(xiàn)出顯著提升,。Thermostable RNase H的最佳活性溫度在65℃以上,，更高的反應(yīng)溫度能夠顯著提升反應(yīng)的特異性和效率，減少非特異性切割,。這一特性使其在分子生物學(xué)實驗中展現(xiàn)出廣泛的應(yīng)用潛力,，例如：

圖2.Thermostable RNase H和E. coli RNase H三維結(jié)構(gòu)圖[1]

Thermostable RNase H常用于病原菌檢測實驗中,，如在宏基因組測序（mNGS）和病原靶向測序（tNGS）中常用于rRNA去除實驗，若分子酶中存在宿主或其他背景菌核酸殘留,，可能會嚴重影響檢測結(jié)果的準確性,。為此,，翌圣生物基于UCF.ME®超潔凈工藝技術(shù)推出UCF.ME® Thermostable RNase H (Cat#14545)，該產(chǎn)品由UCF.ME®超潔凈分子酶生產(chǎn)基地生產(chǎn),，從物料篩選到環(huán)境控制,，從工藝優(yōu)化到質(zhì)量檢測，每一環(huán)節(jié)均經(jīng)過嚴格把控,，確保極低的背景菌gDNA殘留和核酸酶殘留,，為實驗結(jié)果的準確性、可靠性和重復(fù)性提供了強有力的保障,。

翌圣UCF.ME®  Thermostable RNase H  (Cat#14545)

圖3.UCF.ME® Thermostable RNase H活性檢測結(jié)果

注：反應(yīng)條件：50℃ 20min,；RNA:DNA底物-20 pmol

通過對不同批次的UCF.ME® Thermostable RNase H進行宿主（E.coli）gDNA殘留檢測，結(jié)果顯示,，3批次產(chǎn)品的宿主gDNA殘留量均遠低于0.02 copies/U,，確保了產(chǎn)品的高純度和實驗的可靠性。

圖4.UCF.ME® Thermostable RNase H宿主gDNA殘留結(jié)果

將25 U UCF.ME® Thermostable RNase H分別與核酸底物孵育，并通過瓊脂糖凝膠電泳分析譜帶變化,。實驗結(jié)果表明,，翌圣的3個批次UCF.ME® Thermostable RNase H均未檢測到核酸外切酶、切口酶或RNase殘留,，為實驗結(jié)果的準確性和可靠性提供了有力保障,。

圖5.UCF.ME® Thermostable RNase H核酸外切酶、切口酶,、RNase殘留檢測結(jié)果

將UCF.ME® Thermostable RNase H分別置于4℃處理32天,、25℃處理16天和37℃處理7天后，測定其酶活,。結(jié)果顯示,，酶活均無明顯下降，充分證明了翌圣UCF.ME® Thermostable RNase H在寬溫度范圍內(nèi)具有優(yōu)異的穩(wěn)定性,，能夠滿足不同實驗條件的長期存儲和使用需求,。

圖6.UCF.ME® Thermostable RNase H加速穩(wěn)定性結(jié)果

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參考文獻：

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