使用EVIDENT共聚焦顯微鏡對血管化腫瘤細胞球芯片進行觀察研究

來源：儀景通光學科技（上海）有限公司 2025年03月07日 09:26

研究顯示,，腫瘤可通過誘導血管生長來支持其旺盛的活性,。這些血管作為腫瘤的生命線,，在腫瘤微環(huán)境（TME）中對于其活性起到了相當重要的作用,。到目前為止,，對腫瘤在生化和生物力學刺激的反應,，大多是在靜態(tài)條件下進行評估,，并沒有考慮到血流對腫瘤的影響,。本篇文章,，我們提供了一個腫瘤-芯片平臺，通過流經(jīng)可灌注血管網(wǎng)絡的介質流來評估腫瘤微環(huán)境,，并測量血流中的給藥效應,。

圖1.微流控設備和腫瘤模型。（左）微流控設備圖,；（右）具有可灌注血管網(wǎng)絡的腫瘤模型,。

腫瘤細胞球在微流控設備中的3D觀察結果

本研究中,，我們在微流控設備中將人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）與含有人乳腺癌細胞（MCF-7）的腫瘤細胞球進行共同培養(yǎng)，以重現(xiàn)包括血管網(wǎng)絡在內(nèi)的腫瘤微環(huán)境,。為了確認微流控設備中血管網(wǎng)絡的可灌注性,，我們使用FLUOVIEW共聚焦顯微鏡觀察熒光微球（綠色）是否能夠連續(xù)通過血管網(wǎng)絡和球細胞。因細胞球較厚,，我們很難獲得培養(yǎng)樣本的三維圖像,。通常需要較高的激發(fā)光強度才能產(chǎn)生足以能夠檢測到的熒光信號強度。

但是,，較高的激發(fā)光強度也會增大光毒性,，從而導致細胞損傷。為了解決這一問題,，我們使用集成了TruSpectral全真光譜檢測技術和高靈敏度GaAsP探測器的FLUOVIEW共聚焦顯微鏡,，捕獲微弱的熒光信號，同時盡量降低激光器的功率,。

圖2.腫瘤細胞球及其血管網(wǎng)絡,。細胞核：青色（405 nm，Hoechst 33342）,，RFP-HUVEC：紫紅色（561 nm,，RFP），E-鈣粘蛋白：黃色（640 nm,，Alexa Fluor 633）,。

(a) 腫瘤細胞球的投影圖。比例尺：200 μm,，物鏡：UPLSAPO10X2,。（b）（a）中白色框架的3平面圖像（x-y、x-z,、y-z）,。比例尺：20 μm，物鏡：UPLSAPO40X2,。

使用共振掃描振鏡進行血流快速成像

我們還利用熒光微球（綠色,，直徑3.1 μm）檢查了腫瘤細胞球血管網(wǎng)絡內(nèi)的血流。在觀察快速血流時,，常規(guī)掃描振鏡的掃描速度可能不夠,。本實驗中，我們使用配有高速共振掃描振鏡的FLUOVIEW共聚焦顯微鏡采集圖像,。

結果表明,，在將熒光微球注入到微流控設備的通道3時，微球流經(jīng)腫瘤細胞球的中空腔并到達通道1,，說明我們所設計的血管網(wǎng)絡可接受灌注,。確認人工腫瘤細胞球模型用于研究血流對TME影響的有效性后,，我們在隨后的實驗中明確了，在包括血管網(wǎng)絡的TME中,，藥物的療效因血管內(nèi)是否存在血流而異,。我們希望這款三維模型能夠在今后被用作經(jīng)血管給藥模型，以協(xié)助藥物的開發(fā),。

視頻：微流控設備上人造血管和腫瘤細胞球內(nèi)熒光微球的流動。成像條件：65 毫秒/幀,。比例尺：100 μm,。

這項研究的新穎之處在于，在腫瘤細胞球內(nèi),，人工構建的可灌注血管網(wǎng)絡,。可視化血管網(wǎng)絡如何連接細胞球和微流控通道非常重要,。此外,，可以同時觀察血管管腔和流經(jīng)血管結構的血流，對于證明其可灌注性來說也很關鍵,。FLUOVIEW共聚焦顯微鏡上安裝的高速共振掃描振鏡,，能夠對血管網(wǎng)絡（RFP標記）和微球（綠色）動態(tài)流進行成像。

——Ryuji Yokokawa博士

日本京都大學微工程系

腫瘤學研究和藥物研發(fā)對顯微成像的要求非常高,，需要有高速的三維成像能力,，在體的研究還需要低光度性的深層成像，Evident全新激光掃描共聚焦顯微鏡和多光子顯微鏡FV4000（MPE）配備全新的高靈敏硅基半導體檢測器,，具有更高的靈敏度,，降低了光毒性，同時高分辨率的共振掃描振鏡可提供視頻級采集速率,，幫助獲取腫瘤微環(huán)境或藥物代謝的動態(tài)變化過程。

左圖：FV4000激光掃描共聚焦顯微鏡,；右圖：FV4000MPE多光子顯微鏡

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