ELISA檢測試劑盒應(yīng)用定性夾心免疫檢測技術(shù)，用合成的HEV(Hepatitis E virus戊型肝炎病毒)多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段,，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中并孵育,，如果其中存在HEV IgM抗體,，這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面,，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份,。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后,，酶結(jié)合物就會與次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合,，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，加入TMB底物溶液,，在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應(yīng),，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng),，并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性,。

　　ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,，又保留酶的活性。在測定時,，受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng),。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體,，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上,。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析,。由于酶的催化效率很高,，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達到很高的敏感度,。

　　ELISA可用于測定抗原,，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑：(1)固相的抗原或抗體,，即"免疫吸附劑"(immunosorbent);(2)酶標記的抗原或抗體,，稱為“酶聯(lián)物"、“結(jié)合物"(conjugate);(3)酶反應(yīng)的底物。根據(jù)試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件,，可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法,。用于臨床檢驗的ELISA主要有以下幾種類型：

　　在臨床檢驗中，此法適用于檢驗各種蛋白質(zhì)等大分子抗原,，例如HBsAg,、HBeAg、AFP,、hCG等,。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法,。如抗體的來源為抗血清,，包被和酶標用的抗體分別取自不同種屬的動物。如應(yīng)用單克隆抗體,，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,，分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性,，而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應(yīng),，作一步法檢測。

　　雙抗體夾心法是檢測抗原的方法底物顯色,。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物,。通過比色，測知標本中抗原的量,?！　≡谂R床檢驗中，此法適用于檢驗各種蛋白質(zhì)等大分子抗原,，例如HBsAg,、HBeAg、AFP,、hCG等,。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法,。如抗體的來源為抗血清,，包被和酶標用的抗體分別取自不同種屬的動物。如應(yīng)用單克隆抗體,，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,，分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性,，而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應(yīng),，作一步檢測,。

　　在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時,，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結(jié)合,，而不再形成"夾心復(fù)合物"。類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象,，此時反應(yīng)后顯色的吸光值（位于抗原過剩帶上）與標準曲線（位于抗體過剩帶上）某一抗原濃度的吸光值相同（參見1.3.2,，圖1-4），如按常法測讀,，所得結(jié)果將低于實際的含量，這種現(xiàn)象被稱為鉤狀效應(yīng)（hook effect）,，因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落,。鉤狀效應(yīng)嚴重時，反應(yīng)甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果,。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(zhì)（例如血清中HBsAg,、AFP和尿液hCG等）時，應(yīng)注意可測范圍的值,。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng),。

　　假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇,，也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結(jié)合物,。但在HBsAg的檢測中應(yīng)注意亞型問題，HBsAg有adr,、adw,、ayr、ayw4個亞型,，雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應(yīng)性,，這也是用單抗作夾心法應(yīng)注意的問題。