問充質(zhì)干細胞(MSC)是一種源自中胚層的多能干細胞,，能夠從骨,、脂肪,、臍帶,、胎盤、臍血,、皮膚等多樣的組織里分離獲取,，具有強大的增殖能力和多向分化潛能，不僅能分化為成骨細胞,、軟骨細胞,、脂肪細胞等，還能分化為肌細胞,、肝細胞,、胰島細胞等多種細胞類型。間充質(zhì)干細胞在組織工程,、基因治療和免拉治療等諾多方面展現(xiàn)出巨大的應用前景,，為醫(yī)學領域帶來了新的希望和突破方向，對于多種疾病的治療和研究都有著重要意義,。

一,、小鼠脂肪組織獲取

1.3天齡到4周齡(推薦小周齡)小型，頸椎脫白法處死后于75%酒精浸10min,。

2.將小鼠橫向,，背面朝上放置，背部中心嬰向剪開皮膚1cm;沿著開口處撕去腹股溝皮膚,，暴露對稱的腹股溝部位白色胎肪組織,，鈍性剝離。

二,、胎肪MSC分離培養(yǎng)(酶消化法)

1. 消化:取脂肪組織25mL,，4°℃ PBS沖洗3次，去除筋膜及紅細胞,，眼科剪剪碎,，4°CPBS沖洗3次，每5mL脂防分裝入50mL離心管,，加入2倍體積的0.075961型膠原,，37℃恒溫搖床以80r/min的搖速震蕩消化1h，待充分消化后,，加入與酶等體積的含10%FBS的DMEM-F12完quan培養(yǎng)基終止消化,。

2. 離心與計數(shù):300g,，離心10min，去除上層未消化的脂肪組織,、油脂及中層潔液,，5mL紅細胞裂解液重懸沉淀，室溫靜置5min,，200g,，離心5min，去除上清液,，完quan培養(yǎng)基重懸沉淀,，200日網(wǎng)過濾后，取樣計數(shù),，根據(jù)計數(shù)結(jié)果調(diào)整細胞濃度,，最終以(1-5)x101/cm2接種于培養(yǎng)皿中，置于37℃℃,，5%C0,培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

3. 接種培養(yǎng):48h后換液，之后每3d換一次液,，待細胞生長至80%-90%融合時，用體積分數(shù)0.25%膚蛋白酶消化后按1:2傳代培養(yǎng),。

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