小鼠外周血血小板分離液試劑盒

規(guī)格：200 mL/kit

保存：本產(chǎn)品對光敏感,，應(yīng)該室溫避光儲(chǔ)存,，保質(zhì)期 2 年,。無菌開封后,，保存于室溫。

1. 取新鮮抗凝全血（EDTA,、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液,，用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。

2. 在離心管中加入至少5mL的分離液（當(dāng)血液的體積大于等于3mL,，加入2倍體積分離液,，但二者的總體積不能超過離心管的三分之二，否則會(huì)影響分離效果）,。

3. 將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方,，注意保持兩液面界面清晰（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后將血液小心的平鋪于分離液上,，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町?，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多,，加樣的時(shí)間較長,，在離心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正常現(xiàn)象）,。

4. 室溫,，水平轉(zhuǎn)子200-250g ，離心15min（血液的體積越大所需的離心力越大,，離心時(shí)間越長,，最佳的分離條件需摸索）。

5. 離心后,，此時(shí)離心管中由上至下分為四層：最上層為富含血小板的血漿層,；第三層為分離液層；分離液與血漿層之間是白色細(xì)胞層,；第四層為紅細(xì)胞層,。

6. 小心的吸取富含血小板的血漿層到15mL潔凈的離心管中,，加入10mLPBS或細(xì)胞洗滌液（如果需要得到富含血小板的血漿， 可直接吸取,，不再清洗）,。500g，離心20min,。

7. 棄上清,，5mL的PBS或細(xì)胞洗滌液重懸血小板，500g,，離心

20min,。

8. 棄上清，重懸備用,。

注意事項(xiàng)：

A. 開封前顛倒混勻,，本分離液為無菌產(chǎn)品，為延長分離液保存時(shí)間,，請?jiān)跓o菌條件下啟封,，避免微生物污染。,。

B. 分離液使用時(shí)應(yīng)始終保持室溫（18℃~25℃）,，如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預(yù)熱,。4℃或者是溫度較低的條件下離心,，分離效果差。

C. 吸取過多的血小板血漿層下層溶液會(huì)導(dǎo)致交界處白細(xì)胞混雜,。

D. 血液樣本最好為新鮮抗凝血（采血2 h以內(nèi)）,，避免冷凍和冷藏。

 分離示意圖

富含血小板的血漿層細(xì)胞層

分離液層

紅細(xì)胞層

E. 稀釋血液或洗滌細(xì)胞,，不可使用含Ca,、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，降低細(xì)胞得率及純度,。

F. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用,，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞掛壁，影響分離效果,。

G. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異,，可能會(huì)影響分離效果，可以對血液稀釋或者是調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間,， 摸索最佳的分離條件,。

H. 不同動(dòng)物血液在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶在制定分離液時(shí)應(yīng)提供所需分離液的比重,、動(dòng)物種屬及被分離細(xì)胞的名稱,。

參考文獻(xiàn)：

1. Boyum A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow. Scand J Clin Lab Invest Suppl. 1968; 97: 7.

2. Ting A, Morris PJ. A technique for lymphocyte preparation from stored heparinized blood. Vox Sang. 1971 Jun; 20(6): 561-3.

3. Boyum A. Separation of Blood Leucocytes, Granulocytes and Lymphocytes Tissue Antigens. 1974; 4(4): 269-74.

4. Weisbart RH, Webb WF, Bluestone R, Goldberg LS. A simplified method for lymphocyte separation. Vox Sang. 1972; 23(5): 478-80.

5. Recalde HR. A simple method of obtaining monocytes in suspension. J Immunol Methods. 1984 Apr 13;69(1):71-7.

6. B?yumA ,L?vhaugD ,TreslandL.Separation of leucocytes: improved cell purity by fine adjustments of gradient mediu m density and osmolality. Scand J Immunol. 1991 Dec; 34(6):697-712.

7. Harris R, Ukaejiofo EO. Tissue typing using a routine one-step lymphocyte separation procedure. Br J Haematol. 1970 Feb; 18(2):229-35.