細胞株復活的步驟

來源：杭州仟諾生物科技有限公司 2025年02月27日 14:12

　　細胞株的復蘇是細胞培養(yǎng)過程中的重要環(huán)節(jié)：

　　一、前期準備

　　1. 人員與環(huán)境準備

　　- 細胞株復蘇前,，需確保操作人員具備相關的專業(yè)知識和技能，熟悉細胞株的特性及復蘇流程。操作人員應穿戴好實驗服,、手套等防護裝備，做好個人防護,。

　　- 細胞培養(yǎng)室應保持清潔,、無菌，提前用紫外線燈照射或甲醛熏蒸等方式對操作臺面,、空氣等進行消毒處理,。同時，要調(diào)節(jié)好培養(yǎng)室的溫度和濕度,，一般溫度保持在37℃左右,，相對濕度在95%以上，以提供適宜的細胞生長環(huán)境,。

　　2. 器材與試劑準備

　　- 準備好細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿,、移液管、離心管,、吸管,、酒精燈、鑷子等實驗器材,，并確保其均已經(jīng)過嚴格的滅菌處理,。

　　- 配置好相應的培養(yǎng)基，根據(jù)細胞株的種類選擇合適的培養(yǎng)基類型和配方,，加入血清,、抗生素等必要的添加劑。將培養(yǎng)基預熱至37℃,，以提高細胞復蘇后的適應能力,。同時，準備好胰蛋白酶等消化液,，以便后續(xù)對細胞進行傳代培養(yǎng),。

　　二、復蘇操作步驟

　　1. 取出凍存細胞株

　　- 從液氮罐中小心取出含有細胞株的凍存管,，注意避免凍傷,。檢查凍存管是否有裂縫或破損，如有則不能使用,。

　　2. 快速解凍

　　- 迅速將凍存管放入37℃的水浴中,，輕輕搖晃，使凍存液盡快融化,。注意不要讓水進入凍存管內(nèi),，以免污染細胞,。一般來說，在1-2分鐘內(nèi)使凍存液融化即可,。

　　3. 轉(zhuǎn)移細胞

　　- 用酒精棉球擦拭凍存管外壁,，然后在超凈工作臺中打開凍存管。用吸管將融化的細胞懸液轉(zhuǎn)移到預先準備好的含有適量培養(yǎng)基的離心管中,，輕輕吹打混勻,。

　　4. 離心洗滌

　　- 將離心管放入離心機中，按照適當?shù)霓D(zhuǎn)速(一般為800-1000轉(zhuǎn)/分鐘)離心3-5分鐘,，去除上清液中的凍存液成分,，以減少其對細胞的損傷。然后加入適量的培養(yǎng)基重懸細胞,，再次離心洗滌,，重復2-3次。

　　5. 接種培養(yǎng)

　　- 將洗滌后的細胞沉淀用適量的培養(yǎng)基重懸,，制成單細胞懸液,。然后根據(jù)細胞株的生長特性和實驗需求，將細胞懸液接種到培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

　　6. 觀察與記錄

　　- 在細胞復蘇后的最初幾個小時內(nèi)，要密切觀察細胞的形態(tài),、貼壁情況等,，判斷細胞是否復蘇成功。同時,，記錄細胞的生長狀態(tài),、換液時間、傳代時間等信息,，以便后續(xù)對細胞株的培養(yǎng)和管理,。

　　三、注意事項

　　1.細胞復蘇過程應盡量快速完成,，減少細胞在體外暴露的時間,，以提高細胞的存活率。

　　2. 嚴格遵循無菌操作原則,，避免細菌,、真菌等微生物的污染。

　　3. 不同類型的細胞株可能具有不同的生長特性和復蘇要求,，因此在復蘇前應充分了解細胞株的相關信息,，并根據(jù)實際情況調(diào)整復蘇方法和條件。

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