近年來，隨著病理學(xué)研究的不斷深入,，多重免疫熒光(mIHC)技術(shù)正逐步興起,。mIHC是一種可以在一張組織樣本上實(shí)現(xiàn)多重分子標(biāo)記的免疫標(biāo)記技術(shù)，有助于確定靶標(biāo)的亞細(xì)胞定位,、識(shí)別多種細(xì)胞類型以及解決生物標(biāo)志物的相對(duì)接近度,，是研究蛋白質(zhì)表達(dá),、細(xì)胞標(biāo)志物以及分子間相互作用的重要工具,。

Bioss將自主研發(fā)生產(chǎn)的高性能熒光染料與TSA酪胺信號(hào)放大技術(shù)結(jié)合，重磅推出高靈敏度的多重免疫熒光產(chǎn)品mIHC試劑盒,，幫助您實(shí)現(xiàn)對(duì)低豐度靶標(biāo)的可靠檢測(cè)與成像，為您的高分文章增添色彩,！

讓我們先來欣賞幾張使用Bioss mIHC試劑盒得到的多色圖像,。

技術(shù)原理

酪酰胺信號(hào)放大(Tyramide signal amplification, TSA)技術(shù)是一類利用辣根過氧化酶(HRP)對(duì)靶蛋白進(jìn)行高密度原位標(biāo)記的酶學(xué)檢測(cè)方法,。其原理是利用酪胺的過氧化物酶反應(yīng)，酪胺熒光素底物在HRP和H₂O₂的作用下被活化,，產(chǎn)生的活化熒光底物能與目標(biāo)蛋白的蛋白殘基共價(jià)結(jié)合,，導(dǎo)致在抗原-抗體結(jié)合位點(diǎn)大量沉積熒光素,，實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大,。通過熱修復(fù)處理,，將前一輪非共價(jià)結(jié)合的抗體洗掉,，而熒光素穩(wěn)定結(jié)合在蛋白上，進(jìn)行下一輪染色,。直至所有抗體孵育結(jié)束,，進(jìn)行核染色,，封片,，掃描,。

技術(shù)優(yōu)勢(shì)

實(shí)驗(yàn)步驟

mIHC 試劑盒產(chǎn)品線

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

試劑優(yōu)化：本試劑盒中的修復(fù)/速除二合一緩沖液效果遠(yuǎn)勝普通修復(fù)液，顯著杜絕“串染”,、“過修復(fù)”現(xiàn)象,；快速反應(yīng)緩沖液使反應(yīng)體系不再依賴H₂O₂，將反應(yīng)時(shí)間從10-20 min縮短至10 sec-5 min,；水晶封片劑采用抑制氣泡配方及增強(qiáng)型防淬滅配方,，有效防止封片過程產(chǎn)生氣泡，并使TSA熒光可保存6個(gè)月-2年,。

信號(hào)穩(wěn)定：TSA標(biāo)記是穩(wěn)定的共價(jià)結(jié)合,，熒光信號(hào)穩(wěn)定，基本不受連續(xù)孵育,、熱修復(fù)和抗體剝離處理影響,。

操作簡(jiǎn)單：可以使用同一種屬的不同一抗搭配同一二抗使用，解除抗體種屬限制,，降低了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的難度和復(fù)雜性,；多輪單染，每輪獨(dú)立互不干擾,，極大減少了交叉反應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,；簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)流程，提高了實(shí)驗(yàn)效率,。

節(jié)省樣本：一張切片可進(jìn)行多重靶標(biāo)深度分析,，節(jié)約珍貴樣本。

高分辨率及低背景：抗體更高比例的稀釋能夠降低非特異性結(jié)合。

多靶標(biāo)同時(shí)檢測(cè)與分析：mIHC技術(shù)能夠在一張切片上同時(shí)檢測(cè)多個(gè)靶標(biāo),，可以同時(shí)獲取關(guān)于細(xì)胞定量,、細(xì)胞亞群分型、細(xì)胞空間排列等多個(gè)類型的信息,，提供了更全面的組織分析,。

高精準(zhǔn)度：mIHC技術(shù)避免了多張切片間比較可能帶來的不連續(xù)性誤差，提供了更高精準(zhǔn)度的結(jié)果,。

空間位置信息的分析能力：mIHC技術(shù)易于對(duì)空間位置信息進(jìn)行分析，探究標(biāo)記物的共定位情況,、表達(dá)量和空間關(guān)系,，對(duì)于理解細(xì)胞間的相互作用和腫瘤微環(huán)境至關(guān)重要,。

靈活的分析方式：mIHC技術(shù)的多靶標(biāo)染色結(jié)果可以靈活地進(jìn)行自由組合分析,，也可以單獨(dú)拆分信號(hào)進(jìn)行分析,，能夠根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛿?shù)據(jù)分析需求來定制分析方案,。

定量分析：mIHC染色結(jié)果可以配合智能圖像分析軟件使用,，進(jìn)行多參數(shù)分析,，實(shí)現(xiàn)定量評(píng)估細(xì)胞密度、表型和定位等,。

高特異性和高靈敏度：TSA信號(hào)放大，靈敏度高達(dá)傳統(tǒng)方法的100倍,，能夠檢測(cè)到更低濃度的靶標(biāo),，甚至是一些傳統(tǒng)方法無法檢測(cè)到的低豐度蛋白。