前言水光針是一種無創(chuàng)、無痛的微針美容項目,，其主要成分通常包含透明質(zhì)酸鈉,、氨基酸和維生素等。成年人在皮膚表層注射這些活性成分,，可實現(xiàn)暫時性補水,，并改善皮膚干燥、膚色暗沉等面部問題,。水光針中添加氨基酸的主要作用是增強對肌膚的保濕和修復,，而氨基酸的含量直接影響產(chǎn)品的效果。因此準確測定水光針產(chǎn)品中的氨基酸非常重要,。由于氨基酸結(jié)構(gòu)中不含紫外吸收官能團,，因此無法直接通過常規(guī)紫外檢測器進行檢測。目前很多標準中氨基酸的檢測主要采用衍生法,，即,，首先使用衍生化試劑（一般是 OPA、FMOC 等有紫外吸收的化合物）在堿性條件下對氨基酸進行衍生,，得到具有紫外吸收能力的衍生物,，然后用紫外檢測器或者熒光檢測器進行檢測[1-3]。這種方法操作步驟相對復雜,，且可能受到基質(zhì)干擾,。也有標準方法利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)直接進行檢測[4]，雖然能夠減小基質(zhì)干擾,，提高選擇性,，但檢測成本較高，不適用于對醫(yī)美產(chǎn)品的生產(chǎn)進行監(jiān)控,。本研究采用液相色譜串聯(lián)單四極桿質(zhì)譜系統(tǒng),，開發(fā)出一種能夠快速準確地分析三種氨基酸的方法，一針運行只需11min,。與先前報道的衍生法相比,，本文所述的方法無需衍生步驟，操作比較簡單,；并且該方法抗基質(zhì)干擾能力較強,，具有較高的靈敏度。

實驗部分試劑和樣品甲醇,、乙腈為色譜級,，均購自安譜公司,；乙酸銨為色譜級，購自Sigma公司,；實驗用水為 Millipore Milli-Q 超純水系統(tǒng)現(xiàn)制備的高純?nèi)ルx子水,；氨基酸標準品及水光針樣品由用戶提供。儀器和設備采用與 Agilent InfinityLab LC/MSD iQ（部件號 G6160A）聯(lián)用的 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜系統(tǒng),，該色譜系統(tǒng)配備如下安捷倫組件：Agilent 1260 Infinity II 四元泵（部件號 G7111B）,、Agilent 1260 Infinity II 自動進樣器（部件號 G7129A）和 Agilent1260 Infinity II 柱溫箱（部件號 G7116A）。標準溶液制備分別稱取適量脯氨酸,、丙氨酸和甘氨酸標準品,，溶于甲醇中，配制得到濃度為5500μg/mL的標準儲備液,；然后用甲醇進一步稀釋,，配制得到濃度分別為 1、5,、10,、20、40μg/mL的系列標準溶液,。

樣品前處理取適量水光針樣品,，用甲醇稀釋 10 倍，離心后,，取上清液進樣分析,。色譜條件色譜柱： Amide色譜柱，4.6×150mm,3.5μm流速： 0.6mL/min進樣量： 10μL柱溫： 30 °C流動相 A： 水流動相 B： 乙腈流動相 C： 0.2mol/L乙酸銨水溶液梯度程序（如表 1）：

結(jié)果與討論本實驗采用 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜串聯(lián)單四極桿質(zhì)譜系統(tǒng)建立了脯氨酸,、丙氨酸和甘氨酸的檢測方法（如圖 1）,。使用該方法條件檢測三種氨基酸，在各自特征離子的 SIM 掃描下,，獲得了較高的靈敏度，相互之間為干擾,，有良好的專屬性,。同時，該方法運行時間僅需要11min,，能夠快速完成大批量的樣品分析,，獲得較高的樣品分析效率。

方法精密度取“標準溶液制備”項下的20μg/mL脯氨酸,、丙氨酸和甘氨酸混標溶液,，重復進樣 6 次，計算所得到的保留時間和峰面積相對標準偏差 (RSD),，結(jié)果如下（如表 3）,。從表中可以看出,，三種氨基酸的保留時間 RSD 均小于 0.02%，峰面積 RSD 均小于 1.0%,，表明該方法具有較高的精密度,。

靈敏度利用所開發(fā)的方法對1μg/mL混合標準溶液進行分析，結(jié)果如下（圖 2）所示,。此濃度下的脯氨酸,、丙氨酸和甘氨酸的信噪比分別為2456、2336 和 1061,。以此濃度及信噪比計算檢出限和定量限,，三種氨基酸的結(jié)果如下：以 3 倍信噪比作為檢出限，則脯氨酸,、丙氨酸,、甘氨酸的檢出限分別為1.2ng/mL、1.3ng/mL,、2.8ng/mL,。以 10 倍信噪比作為定量限，則脯氨酸,、丙氨酸,、甘氨酸的檢出限分別為4.1ng/mL、4.3ng/mL,、9.4ng/mL,。上述結(jié)果表明，采用該方法測定該類型樣品中的三種氨基酸具有較高的靈敏度,。

結(jié)論本實驗采用 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜串聯(lián)單四極桿質(zhì)譜系統(tǒng),，建立了醫(yī)美類樣品中脯氨酸、丙氨酸和甘氨酸的檢測方法,。傳統(tǒng)氨基酸測試方法一般采用柱前或柱后衍生的方式,，需要用到特殊的衍生試劑、專用的色譜柱及流動相體系等,，方法的復雜性較高,，結(jié)果的重復性以及穩(wěn)定性也存在一定的問題。本方法與傳統(tǒng)的氨基酸衍生法相比屬于直接測定方法,，不存在衍生操作,，具有操作簡便、選擇性好和靈敏度高的特點,，非常適合醫(yī)美類實際樣品中氨基酸的準確定量,。