腸道黏膜是身體重要的免疫屏障,，由相關的淋巴組織和免疫細胞構成。腸道黏膜異常被認為與多種疾病密切相關,，如炎癥性腸病,、IgA 腎病等。

科學家從未停止對腸道黏膜免疫屏障的探索,。腸道固有層分布著豐富的免疫細胞,，他們在維持腸道免疫穩(wěn)態(tài)方面十分重要，制備相應的單細胞懸液,，對腸道固有層細胞進行研究,，對探索腸道疾病的發(fā)病機制、疾病治療的作用靶點以及藥物起效的作用機制具有重要意義,。

單細胞懸液制備步驟

1,、小腸樣品制備

采用頸椎脫位法處理小鼠后固定于手術臺，于腹部噴灑 75% 乙醇消毒,，對皮膚和肌肉層進行中線切口,，暴露腸道，并從盲腸端開始截取 10 cm 小腸,， 隔醫(yī)用紗布放置于冰上,，小心地用眼科手術剪和鑷子去除小腸腸系膜和脂肪組織，并去除派氏結,?？v向剖開小腸，PBS 緩沖液沖洗腸道內容物直至干凈,。

2,、試劑配置

根據(jù)后續(xù)實驗選擇配套的消化酶試劑盒，流式分析,，原代培養(yǎng)等可選用溫和酶消化試劑盒,。

3,、小腸固有層單細胞懸液制備

每個樣品準備好對應的消化酶和終止液，常溫解凍,。在平皿中用 PBS 緩沖液清洗腸段并用眼科手術剪剪成小塊( 約5 mm長) ,。將小腸小塊收集在含有消化酶的消化管中。

將消化管放入單細胞胞懸液制備儀上,，選擇對應的腸道程序,，程序結束后，儀器自動停止,，然后加入終止液,，離心，棄掉上清,，用培養(yǎng)基重懸即可得到小腸固有層單細胞懸液,。（如下圖）

采用單細胞懸液制備儀進行，可批量制備單細胞懸液,，節(jié)約了實驗時間,，儀器上有人體和小鼠各個組織、器官對應的程序,，提高了單細胞懸液制備的活率和得率,，使后續(xù)實驗進行更加順利。