腸道黏膜是身體重要的免疫屏障,，由相關(guān)的淋巴組織和免疫細(xì)胞構(gòu)成,。腸道黏膜異常被認(rèn)為與多種疾病密切相關(guān)，如炎癥性腸病,、IgA 腎病等。

科學(xué)家從未停止對(duì)腸道黏膜免疫屏障的探索。腸道固有層分布著豐富的免疫細(xì)胞,，他們?cè)诰S持腸道免疫穩(wěn)態(tài)方面十分重要,，制備相應(yīng)的單細(xì)胞懸液，對(duì)腸道固有層細(xì)胞進(jìn)行研究,，對(duì)探索腸道疾病的發(fā)病機(jī)制,、疾病治療的作用靶點(diǎn)以及藥物起效的作用機(jī)制具有重要意義。

單細(xì)胞懸液制備步驟

1,、小腸樣品制備

采用頸椎脫位法處理小鼠后固定于手術(shù)臺(tái),，于腹部噴灑 75% 乙醇消毒，對(duì)皮膚和肌肉層進(jìn)行中線切口,，暴露腸道,，并從盲腸端開(kāi)始截取 10 cm 小腸， 隔醫(yī)用紗布放置于冰上,，小心地用眼科手術(shù)剪和鑷子去除小腸腸系膜和脂肪組織,，并去除派氏結(jié)?？v向剖開(kāi)小腸,，PBS 緩沖液沖洗腸道內(nèi)容物直至干凈。

2,、試劑配置

根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇配套的消化酶試劑盒,，流式分析，原代培養(yǎng)等可選用溫和酶消化試劑盒,。

3,、小腸固有層單細(xì)胞懸液制備

每個(gè)樣品準(zhǔn)備好對(duì)應(yīng)的消化酶和終止液，常溫解凍,。在平皿中用 PBS 緩沖液清洗腸段并用眼科手術(shù)剪剪成小塊( 約5 mm長(zhǎng)) ,。將小腸小塊收集在含有消化酶的消化管中。

將消化管放入單細(xì)胞胞懸液制備儀上,，選擇對(duì)應(yīng)的腸道程序,，程序結(jié)束后，儀器自動(dòng)停止,，然后加入終止液,，離心，棄掉上清,，用培養(yǎng)基重懸即可得到小腸固有層單細(xì)胞懸液,。（如下圖）

采用單細(xì)胞懸液制備儀進(jìn)行，可批量制備單細(xì)胞懸液,，節(jié)約了實(shí)驗(yàn)時(shí)間,，儀器上有人體和小鼠各個(gè)組織、器官對(duì)應(yīng)的程序,，提高了單細(xì)胞懸液制備的活率和得率,，使后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行更加順利。