胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)界的“香餑餑”,，備受胞胞們的“寵愛”,，其實(shí)還有一個(gè)“香煎餅”,，大家可知道,？對(duì)一些細(xì)胞的特殊實(shí)驗(yàn)研究，透析胎牛血清可謂是散發(fā)著一股“煎餅的清香”,。

透析胎牛血清(abs945)

透析法處理血清是去除了分子質(zhì)量小于10kDa的小分子,，避免外源小分子對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生干擾。10kDa以下的小分子有化學(xué)小分子,、核苷酸,、某些激素、鹽,、低分子量蛋白質(zhì),、氨基酸、細(xì)胞因子,、葡萄糖,、殘留抗生素和其他外源分子等。適合脈沖示蹤實(shí)驗(yàn)（例如同位素標(biāo)記特定小分子,，并加入到培養(yǎng)體系中,，以研究細(xì)胞代謝），也適合轉(zhuǎn)染CHO后的篩選等應(yīng)用,。是研究蛋白質(zhì)組學(xué),、同位素標(biāo)記、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和報(bào)告基因分析,、報(bào)告基因細(xì)胞系篩選的很好工具,，接下來我們了解一下具體應(yīng)用。

1,、小分子標(biāo)記實(shí)驗(yàn)

該實(shí)驗(yàn)是將用同位素標(biāo)記的小分子如核苷酸摻入到培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞,，來標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)新合成的DNA，一般培養(yǎng)一段時(shí)間,，細(xì)胞中的DNA將都被同位素標(biāo)記,，然后進(jìn)行DNA提取，純化等實(shí)驗(yàn)分析。為避免胎牛血清中天然核苷酸的干擾,，這時(shí)就需要用到透析胎牛血清,，以保證摻入細(xì)胞DNA中的核苷酸均為標(biāo)記核苷酸。

小分子標(biāo)記實(shí)驗(yàn)示例

2,、陽性轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆的篩選

一些有基因缺陷的細(xì)胞株如CHO-DFGRˉ,，缺乏二氫葉酸還原酶(DHFR)，必須在添加了次黃嘌呤,、胸腺嘧啶和甘氨酸的培養(yǎng)液中才能存活,。可將我們想要表達(dá)的目的基因和DHFR基因構(gòu)建質(zhì)粒,，然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞,，用不含上述添加劑的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。未轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒的缺陷細(xì)胞會(huì)凋亡,；成功轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞會(huì)存活下來,，形成細(xì)胞克隆。為避免胎牛血清中次黃嘌呤,、胸腺嘧啶和甘氨酸的干擾,，這時(shí)就需要用到透析胎牛血清，以保證wan全培養(yǎng)液中不含次黃嘌呤,、胸腺嘧啶和甘氨酸,。

陽性轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆的篩選示例

3、細(xì)胞平臺(tái)藥物篩選

細(xì)胞水平藥物篩選是更接近生理?xiàng)l件的一種藥物篩選模型,，其模型是擬設(shè)計(jì)藥物作用的靶細(xì)胞,，應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)獲取所需細(xì)胞，將這些細(xì)胞與候選化合物相互作用,，通過與生化水平篩選類似的檢測(cè)技術(shù)測(cè)定化合物的作用能力,，從而對(duì)化合物進(jìn)行篩選。在藥物篩選過程中,，未避免外源性的小分子對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾,，就需要用到透析胎牛血清。

細(xì)胞平臺(tái)藥物篩選示例

本期講解就到這里了,，如有細(xì)胞培養(yǎng)問題,，歡迎一起交流。

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