人（Human） 新喋呤（Neopterin） ELISA試劑盒

本試劑僅供研究使用     

 人（Human） 新喋呤（Neopterin） ELISA試劑盒

試驗原理：

　　　　Neopterin試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知Neopterin濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測,。先將Neopterin和生物素標記的抗體同時溫育,。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,，然后加入底物A、B,，和酶結(jié)合物同時作用,。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中Neopterin的濃度呈比例關(guān)系,。

人（Human） 新喋呤（Neopterin） ELISA試劑盒　　　

試劑盒內(nèi)容及其配制

試劑盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制

96/48人份酶標板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型

塑料膜板蓋1塊半塊即用型

標準品：80nmol/L1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按說明書進行稀稀

空白對照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型

標準品稀釋緩沖液1瓶（4.0ml）1瓶（2.0ml）即用型

生物素標記的抗Neopterin抗體1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型

親和鏈酶素-HRP1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）即用型

洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按說明書進行稀釋

底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型

底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型

終止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型

標本稀釋液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型

自備材料

蒸餾水,。

加樣器：5ul、10ul,、50ul,、100ul、200ul,、500ul,、1000ul。

振蕩器及磁力攪拌器等,。

安全性

避免直接接觸終止液和底物A,、B。一旦接觸到這些液體,，請盡快用水沖洗,。

實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品,。

不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。

操作注意事項

試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,，不可保存。

實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存,，以免變質(zhì)。

不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。

使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A,、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器,。

使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。

洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水,。

底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,，有毒,。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

加入試劑的順序應(yīng)一致,，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣,。

按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作,。

樣品收集,、處理及保存方法

血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。

細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,，取上清液

保存------如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備

標準品：標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備,，不能儲存,。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：

80 nmol/L（6號標準品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul,。

40 nmol/L（5號標準品）100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液

20 nmol/L（4號標準品）100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液

10 nmol/L（3號標準品）100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液

5.0 nmol/L（2號標準品）100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液

2.5 nmol/L（1號標準品）100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液

0 nmol/L（空白對照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul,。

洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋,。

操作步驟

使用前，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差,。

根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。

加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時。

甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。

每孔加入60ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。

甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。

每孔加入底物A,、B各50ul，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。

取出酶標板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,。

在450nm波長處測定各孔的OD值。

建議使用的實驗方案

標準品濃度（nmol/L）

A8080樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

B4040樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

C2020樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

D1010樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

E5.05.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

F2.52.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

局限

6號標準品以上的結(jié)果為非線性的,，根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果,。

試劑盒性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細胞因子反應(yīng),。

3. 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析

1,、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2,、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應(yīng)的Neopterin標準品濃度為橫坐標（X）,，做得相應(yīng)的曲線,，樣品的Neopterin含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3,、檢測值范圍：0-80nmol/L

4,、敏感度： 0.1 nmol/L