鴨腦微血管內(nèi)皮細胞永生化如何培養(yǎng)？

貨號：WS-003Y（免疫熒光鑒定）

細胞詳述

腦微血管內(nèi)皮細胞是血腦屏障的主要組成成分，能夠限制可溶性物質(zhì)和細胞等從血液進入大腦,。大腦微血管內(nèi)皮細胞與外周內(nèi)皮細胞相比具有一些相同特性,。

腦微血管內(nèi)皮細胞存在許多細胞間緊密連接,，產(chǎn)生很高的跨內(nèi)皮阻抗,，延遲細胞旁的通量,；腦微血管的內(nèi)皮細胞間銜接得十分緊密，不象其他組織的血管內(nèi)皮細胞那樣有較大的縫隙腦微血管內(nèi)皮細胞缺乏內(nèi)皮細胞的窗孔結(jié)構(gòu),，其液相物質(zhì)胞飲水平較低,；腦微血管內(nèi)皮細胞具有不對稱定位酶和載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)運系統(tǒng)，從而產(chǎn)生 “兩極分化”的表現(xiàn)型,。 與外周內(nèi)皮細胞相同,，大腦微血管內(nèi)皮細胞表面表達細胞粘附分子，調(diào)控白細胞進入大腦,。由于微血管內(nèi)皮細胞的器官特異性,，內(nèi)皮細胞通常取源于疾病研究的相關(guān)組織。

該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因,。

注意事項：  收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代,，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基，不能用來培養(yǎng)細胞,。

細胞特性

1) 組織來源于實驗動物的腦組織,。

2) 細胞鑒定：血管假性血友病因子（vWF）免疫熒光染色為陽性。

3) 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%,。

4) 不含有 HIV-1,、 HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌,。

5) 細胞生長方式：鋪路石狀細胞,，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng),。

產(chǎn)品的運輸和保存

視天氣狀況和運輸距離遠近,，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。

1) 1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸,；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作,，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月,。

2) T-25培養(yǎng)瓶充滿wan全培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,，如懸浮的細胞較多,，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

推薦培養(yǎng)基

我們推薦使用鴨腦微血管內(nèi)皮細胞-永生化細胞專用培養(yǎng)基（WS-003Y-001A）作為體外培養(yǎng)鴨腦微血管內(nèi)皮細胞的培養(yǎng)基,。

貼壁細胞的傳代培養(yǎng)

準備和消化：在無菌條件下操作,，將舊的培養(yǎng)基去除后,，用PBS溶液輕輕潤洗細胞,，去除殘留的血清成分。接著加入適量的0.25%胰蛋白酶消化液,，置于37℃,、5% CO2培養(yǎng)箱中消化2-3分鐘，直至細胞表面變得圓滑和亮澤,。隨后加入含有10% FBS的培養(yǎng)基終止消化作用,，輕柔吹打或振蕩培養(yǎng)皿，使細胞懸浮在培養(yǎng)基中,。

收集和傳代 ：將處理好的細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中,，進行輕度離心（室溫，1000rpm,，5分鐘）,，以收集細胞。隨后,，吸去上清液,，加入適量的wan全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。按照預(yù)定的傳代比例（通常為1:2或1:3）,，將懸液中的細胞分別移植到新的培養(yǎng)皿中,。標記新培養(yǎng)皿上的細胞信息后，輕輕搖勻,，將培養(yǎng)皿放置于37℃,、5% CO2培養(yǎng)箱中進行進一步的培養(yǎng)。

懸浮細胞或半貼壁細胞的傳代培養(yǎng)

直接傳代：將懸浮細胞在培養(yǎng)皿中沉淀后,，吸取部分上清液,，然后用吸管輕柔吹打以形成細胞懸液。最后將懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng),。這種方法適合于不需要酶消化的細胞傳代,，操作簡便，但可能會造成細胞損傷和損失,。

離心方法：先將懸浮細胞懸液離心,，去除上清液后用新的培養(yǎng)基重懸細胞。然后根據(jù)需要的傳代比例將細胞轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中,。這種方法適合于細胞數(shù)量較多時,，通過離心可以有效收集和分離細胞,，有利于細胞的健康和穩(wěn)定傳代。

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