土壤亮氨酸氨基肽酶（Solid-Leucine Aminopeptidase,S- LAP）

試劑盒說明書

微量法 100 管/48 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

S-LAP 是一類能水解肽鏈 N-末端為亮氨酸的酶，由土壤微生物分泌,。S-LAP 活性變化與機體某些病理狀態(tài)密切相關(guān),。

測定原理：

S-LAP 分解L-亮氨酰對硝基苯胺生成對硝基苯胺，后者在 405nm 有最大吸收峰,，通過測定吸光值升高速率來計算S-LAP 活性,。

試劑的組成和配制：

自備儀器和用品：

酶標儀/可見分光光度計、臺式離心機,、水浴鍋,、可調(diào)式移液器、96 孔板/微量石英比色皿和蒸餾水,。

S-LAP 測定步驟：

1,、分光光度計或酶標儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 405nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2、在試劑二瓶中加入 15ml 試劑一充分溶解（如較難溶解,，可 60℃水浴加熱約 30min 促進溶解）,；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融,。

3,、操作表：

混勻,， 37℃振蕩反應(yīng) 1h 后,，8000g 4℃離心 10min，取 200μl 上清液于微量石英比色皿或 96 孔板中,，405nm 處測定吸光值 A,，計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設(shè)一個對照管,。

S-LAP 活力單位的計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

單位的定義：每天每 g 土樣每天生成 1 μmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位,。

S-LAP（μmol/d /g 土樣）＝ΔA×V 反總÷（ε×d）×106÷W÷T=14.8×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，3×10-4 L,；ε：對硝基苯胺摩爾消光系數(shù),，9.72×103 L / mol /cm,；d：比色皿光徑，1cm,；T：反應(yīng)時間,，1h=1/24d； W：樣本質(zhì)量,，0.05g,。

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

單位的定義：每天每 g 土樣每天生成 1 μmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

S-LAP（μmol/d /g 土樣）＝ΔA×V 反總÷（ε×d）×106÷W÷T=29.6×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積,，3×10-4 L,；ε：對硝基苯胺摩爾消光系數(shù)，9.72×103 L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，0.5cm；T：反應(yīng)時間,，1h=1/24d,； W：樣本質(zhì)量，0.05g,。