培養(yǎng)信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml）或明膠（0.1%）

培養(yǎng)基含F(xiàn)BS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性可傳1-2代,；不建議多次傳代

消化液0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

兔外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài),。

發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三,、使用方法

人外周血淋巴細(xì)胞是一種懸浮細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈圓形,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞不增殖,；不傳代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn),。

客戶收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

2. 懸浮細(xì)胞處理

1）收集T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50mL離心管中，用PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶1-2次,，收集清洗液,；

2）1200-1500rpm離心3min，棄上清,，收集細(xì)胞沉淀,；

3）加入5mL新鮮培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻,、分散細(xì)胞,；將分散好的細(xì)胞調(diào)整合適密度接種至培養(yǎng)器皿中，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4）若遇到懸浮細(xì)胞團(tuán)塊較大,，無法機(jī)械吹散時(shí),，向步驟2）中細(xì)胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至離心管中，用吸-管輕輕吹打混勻,，37℃溫浴2-3min,，消化結(jié)束后，加入胰

酶抑制劑(或血清）終止消化,，用吸管輕輕吹打,，分散細(xì)胞；1200rpm離心5min,，棄上清,，

收集細(xì)胞沉淀；

5）加入5mL新鮮培養(yǎng)基,，用吸管輕輕吹打混勻,；按傳代比例進(jìn)行接種傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

6）待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后,，培養(yǎng)觀察,，用于實(shí)驗(yàn)；之后再按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

四,、注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請(qǐng)注意保持無菌操作,。

3. 消化過程中，胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng),，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。

5. 該細(xì)胞只可用于科研。

特殊注意事項(xiàng)

6. 此細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,，請(qǐng)注意不要直接倒掉,，造成損失；懸浮細(xì)胞因多數(shù)胞體較小,，離心收集時(shí),，請(qǐng)注意懸液中細(xì)胞是否收集，可適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)或增加離心時(shí)間3-5min,，增加細(xì)胞獲取量,。

備注：由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,，以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考