微生物限度檢測是一種在生物制藥,、醫(yī)療器械,、化妝品企業(yè),、食品飲料、醫(yī)療疾控,、第三方檢測,、檢驗檢疫等單位機構中廣泛進行的，主要是用來評估藥品,、食品飲料,、生物制劑、化妝品,、醫(yī)療器械等產(chǎn)品中微生物污染程度的質量控制方法,?？梢詸z測樣品中需氧菌、霉菌,、酵母菌總數(shù),，以及特定致病菌——如大腸桿菌、沙門氏菌,、金黃色葡萄球菌等特定病原微生物的存在,，目的是確保產(chǎn)品中的微生物數(shù)量在安全范圍內，避免對消費者和使用者健康造成危害,。更具體的來講,，在制藥行業(yè)，能確保無菌或微生物限度,，符合中國藥典,、美國FDA等各國藥品監(jiān)督的要求；在食品飲料生產(chǎn)時,，保障出廠的產(chǎn)品安全，防止微生物污染印發(fā)的健康風險,；在化妝品企業(yè),，確保產(chǎn)品微生物指標符合衛(wèi)生標準規(guī)范。

        進行微生物限度檢測的主要幾種方法有以下幾種：平皿計數(shù)法,，直接通過培養(yǎng)基培養(yǎng)并計數(shù)微生物,；最可能數(shù)法，是通過統(tǒng)計方法估算微生物數(shù)量,；快速檢測法,，如PCR、ATP生物發(fā)光法等,，用于快速篩查,；膜過濾法，適用于液體樣品,，過濾后培養(yǎng)并計數(shù),。

        在上述幾種方法中，平皿法通常用于不可過濾的固體或高黏度樣品,，或者少量的濾液（10ml以下）,；最可能數(shù)法由于通過統(tǒng)計的方法估算的數(shù)值，結果準確度低,。 目前使用較多的是膜過濾法,，其在微生物檢測中具有顯著優(yōu)勢。其原理是將一定量的待檢測液體樣品,，倒入過濾杯中,，使用真空泵產(chǎn)生的負壓吸引力,，使液體能通過濾膜，微生物被截留在膜上,，然后將濾膜置于培養(yǎng)基上培養(yǎng),，最后計數(shù)形成的菌落。所以濾膜法能夠富集樣品中的微生物,，即使微生物濃度很低（如1 CFU/100mL）,，也能通過增加過濾液體的總容量來提高檢測靈敏度。

      在具體準備過濾裝置時,，應當注意過濾裝置的聯(lián)數(shù),，聯(lián)數(shù)是指單次可以同時過濾的樣品數(shù)量。例如R300B單聯(lián)微生物檢測抽濾裝置,，采用的是常規(guī)的上方過濾漏斗,，連接底部集液瓶的結構形式，濾液通過濾膜后直接流入底部試劑瓶待實驗結束后處理,，抽濾瓶帶有接口連接真空泵來進行抽氣形成負壓吸引力,。單聯(lián)過濾裝置結構簡單，整體尺寸小巧,，占用空間少,，每次過濾一組樣品，較為適合檢測樣品量不大的用戶,。

       而針對大型企業(yè),，或者是疾控、第三方檢測等單位,，由于檢測樣品數(shù)量多,，如果每次只能過濾一組樣品，效率低下,。這時候就可以使用多聯(lián)過濾系統(tǒng),，它是通過一組使用金屬材質制作的過濾支架，將多組過濾杯連接起來,，使其可以通過同一臺真空泵來抽氣產(chǎn)生負壓吸力,。典型的如BV-321-A三聯(lián)式和BV-621A六聯(lián)式微生物限度檢測真空抽濾系統(tǒng)，可以同時過濾3組或6組樣品,。支架采用耐腐蝕的陽極鋁合金材質制作,，對應插入3或6支過濾漏斗，漏斗中間放置濾膜,。支架側邊帶有接口連接一個大容量的集液瓶,，濾液通過濾膜后流入集液瓶內暫存，集液瓶底部帶快速排液口,，瓶滿后松開排液管夾可以快速導出濾液,，不需要停下工作打開集液瓶蓋的繁復操作,。集液瓶的頂部有2個接口，一個連接支架,、另一個接抽濾泵,，這樣即可以實現(xiàn)1臺泵搭配1只集液瓶，同時處理數(shù)個過濾漏斗內的樣品,，大幅提升過濾效率,。

       在選擇合適的機型后，具體進行檢測大致包含以下步驟：

1. 準備濾膜：選擇合適的濾膜并滅菌,，也可以直接選購已經(jīng)伽馬射線（輻照）滅菌的無菌包裝過濾膜,。濾膜材質通常推薦使用MCE混合纖維素材料。直徑根據(jù)過濾裝置的漏斗大小來選擇,，一般為47或50mm較為常見,。空間根據(jù)需要檢測的微生物來覺得,，一般為0.22或0.45微米,。推薦使用帶網(wǎng)格線的過濾膜，便于計數(shù)時的觀察,。

2. 過濾樣品：將液體樣品通過濾膜過濾,，微生物被截留。具體根據(jù)選擇的過濾裝置型號參加說明書操作,。

3. 轉移濾膜：將濾膜移至適當?shù)呐囵B(yǎng)基上。

4. 培養(yǎng)：在適宜條件下培養(yǎng),，使微生物生長,。

5. 計數(shù)：培養(yǎng)結束后，計數(shù)濾膜上的菌落數(shù),。