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HEK293瞬轉(zhuǎn)表達培養(yǎng)基可實現(xiàn)細胞快速生長維持細胞高活率及蛋白該表達
上?；菡\生物提供的HEK293 瞬轉(zhuǎn)表達基礎培養(yǎng)基（Basal Medium）與補料培養(yǎng)基（Feed Medium）是完(空)全化學成分限定（Chemically Defined）,，均不含血清,、水解物及任何動物來源的成分,，適合于不同亞型 HEK293 細胞的高密度懸浮培養(yǎng),，可實現(xiàn)重組蛋白和抗體的高水平表達：培養(yǎng) 5 天表達量在200mg/L 左右，7 天表達量 500mg/L 左右,，部分可達 1g/L 以上,。
上海惠誠生物提供的HEK293 瞬轉(zhuǎn)表達培養(yǎng)基已完成美國 DMF 登記（DMF039790）,，更有力的支持客戶需求,。
HEK293 細胞培養(yǎng)基產(chǎn)品描述
| 名稱 | 備注 | 谷氨酰胺 | 葡萄糖 | 生長因子 | 適用細胞 |
| HEK293 CD05 | 初始培養(yǎng)基 | 含 | 6 g/L | 不含 | Expi293F 等 |
| HEK293 FM01AB | 補料培養(yǎng)基 | 不含 | 60g/L | 不含 | |
| HEK293 enhancer | 分泌性蛋白表達增強劑 | 不含 | |||
| PEI | 轉(zhuǎn)染試劑 | 0.5mg/mL | |||
推薦使用說明
| 步驟 | 使用方法 |
| 關(guān)鍵參數(shù)匯總 | 轉(zhuǎn)染時細胞密度：3~5e6 cells/mL, DNA: 1.3mg/L, PEI:4mg/L |
| 細胞傳代 | 0.3 e6 cells/mL 接種，3 天傳代一次,，當細胞倍增時間不低于對照培養(yǎng)基時認為細胞完(空)全適應新培養(yǎng)基,，進入下一步驟 |
| 轉(zhuǎn)染前一天 | 細胞密度調(diào)整到~2 e6 cells/mL 左右 |
| 質(zhì)粒與 PEI 預處理 | 以 20mL 培養(yǎng)體積為例（其他培養(yǎng)體積，相關(guān)試劑需要按體積折算） 1： 取 160uL Trans PEI (母液是 0.5mg/mL),加入 1mL HEK293 CD05 培養(yǎng)基混合均勻,； 2：像 1）中混合液體中加入 26ug 的質(zhì)粒（即質(zhì)粒用量 1.3mg/L)，混合均勻,； 3: 靜止 15~20min |
| 轉(zhuǎn)染 | 1：用新鮮培養(yǎng)基調(diào)整細胞密度至 3~5 e6cells/mL (很重要）,； 2：緩慢滴加上述 PEI 與 DNA 的混合物，并搖動搖瓶使混合物均勻分散,； 3：轉(zhuǎn)染當日記為 Day0,，放入 37℃搖床中，完成轉(zhuǎn)染,； |
| 補料培養(yǎng) | 1：轉(zhuǎn)染后~24h 內(nèi)補加 0.5%的 HEK293 enhancer （且只分泌性蛋白或抗體需要添加 ,，膜蛋白無需加 HEK293 enhancer）和 7%的 HEK293 FM01AB,； 2：Day4 再補加一次 7%的 HEK293 FM01AB 和 3g/L 的葡萄糖 （如培養(yǎng)時間≤5 天，此步忽略）,； 3：活力≤70%即可培養(yǎng)結(jié)束或其他指(空)定培養(yǎng)基時間 |
| 溫度及其他參數(shù) | 1：溫度 37℃,，不降溫 2：搖床轉(zhuǎn)速 120rpm, 50mm 振幅，5-8% CO2,； |
產(chǎn)品運輸及存儲
運輸：常溫或冷鏈運輸,；
存儲：2~8℃，干燥,、避光保存,；
有效期：基礎培養(yǎng)基干粉：2 年；
基礎培養(yǎng)基液體：1 年,；
補料培養(yǎng)基干粉：2 年,；
補料培養(yǎng)基液體：1 年（開封后建議在 3 個月內(nèi)使用完）。
應用范圍
上?；菡\生物生物提供的培養(yǎng)基可用于 HEK293 細胞凍存,、復蘇、傳代,、高密度強化工藝培養(yǎng)及灌流培養(yǎng),，可
實現(xiàn)細胞快速生長，維持細胞高活率及蛋白該表達,。
使用指南
細胞凍存
1．準備處于對數(shù)生長期狀態(tài)較好的細胞,，且細胞活率在 90%以上；
2．檢測活細胞密度,，計算所需的凍存培養(yǎng)基體積,，計算最終細胞密度 1~1.5×10 7 cells/mL；
3．準備好所需的凍存培養(yǎng)基：90%基礎培養(yǎng)基+10% DMSO,，2~8℃冷藏保存,；
4．設置離心力 200×g，離心 5 min,，用凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞至凍存體積,；
5．將懸浮細胞等分保存至適宜規(guī)格的細胞凍存管中；
6．將細胞凍存管置于程序降溫盒中,，按照降溫標準進行降溫,；
7．將細胞轉(zhuǎn)移到液氮罐中保存。
細胞復蘇
1．提前打開水浴鍋,，并設置溫度至 36.5℃~37.0℃,；
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上?；菡\生物科技有限公司自2010年成立以來，一直致力于為客戶提供試劑,，儀器設備和耗材一站式服務,。目前在蘇州和南通的研發(fā)生產(chǎn)基地，專注于體外診斷蛋白,，靶標蛋白,，工業(yè)用酶和細胞因子的生產(chǎn)和定制，按照GMP標準,，為工業(yè)客戶提供大包裝蛋白原料,。
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